[发明专利]重组人白介素－2与聚乙二醇的偶合物

说明书

技术领域

本发明涉及重组人白介素-2通过氨基酸或寡肽与单甲基聚乙二醇连接形成的偶合物；这种偶合物具有较好的血浆稳定性，能够在体内缓慢释放重组人白介素活性发挥药理作用。

背景技术

重组人白介素-2具有促进T细胞的成熟和分化，激活淋巴因子激活的杀伤细胞，促进干扰素的产生等生物活性，是免疫疗法中最重要的细胞因子之一，临床具有较好的抗肿瘤活性。

但是，作为蛋白类药物，重组人白介素-2在体内易被酶解失活，生物半衰期短，影响了其药理作用的发挥。

聚乙二醇(PEG)是具有良好的生物兼容性的中性聚合物，具有高度的亲水性，在水溶液中有较大的水动力学体积，并且没有免疫原性。将PEG与多肽和蛋白类药物分子偶联后，能够提高药物在血浆中的稳定性，减少药物的酶解；避免免疫系统对药物的识别和清除，降低免疫原性；同时避免药物在肾脏的代谢清除，从而显著延长多肽或蛋白类药物在体内的半衰期。

目前PEG对多肽或蛋白的化学修饰均是通过PEG的活性衍生物与药物分子中的氨基形成酰胺键或氨基甲酸酯键。由于蛋白或多肽分子中存在多个氨基，因此得到的偶合物是多种交联产物的混合物。而且，由于对活性位点的直接修饰或空间位阻作用，被修饰药物的生物活性损失较大。

发明内容

本发明的目的是提供聚乙二醇通过氨基酸或寡肽的连接子与rhIL-2连接形成的偶合物。通过选择适当的连接子可以保持偶合物在血浆中的稳定性；到达靶组织后，连接子可以在细胞内释放活性形式的rhIL-2分子，产生药理作用。

本发明一方面提供式I所示的单甲氧基聚乙二醇衍生物通过氨基酸或寡肽的连接子与rhIL-2分子中的氨基连接形成的偶合物：

CH₃O-PEG-OCH₂CONH-(AA)_n-CONH-(rhIL-2)

            I

本发明另一方面提供式II所示的单甲氧基聚乙二醇衍生物通过氨基酸或寡肽的连接子与rhIL-2分子中的氨基连接形成的偶合物：

CH₃O-PEG-OCH₂CH₂OCONH-(AA)_n-CONH-(rhIL-2)

                    II

式I、II中，PEG代表平均分子量5000-40000的聚乙二醇，AA代表L-氨基酸残基n为1-6的整数。

本发明还提供含有式I、II所示的单甲氧基聚乙二醇与rhIL-2的偶合物作为活性成分的药物组合物。

本发明最后还提供含有式I、II所示的单甲氧基聚乙二醇与rhIL-2的偶合物，以及含有式I、II所示的单甲氧基聚乙二醇与rhIL-2的偶合物作为活性成分的药物组合物作为抗肿瘤药物的用途。

具体实施方式

本发明中聚乙二醇与rhIL-2的偶合物的制备可以分为聚乙二醇衍生物的合成及其与rhIL-2的交联两个部分。

式I所示的偶合物可以按照如下方法制备：单甲氧基聚乙二醇在叔丁醇钾作用下，与溴乙酸乙酯反应；反应产物经氢氧化钠水解，然后将水解产物酸化，得到羧甲基取代的单甲氧基聚乙二醇衍生物CH₃O-PEG-OCH₂COOH；通过接肽反应，制备寡肽衍生物CH₃O-PEG-OCH₂CONH-(AA)_n-COOH；CH₃O-PEG-OCH₂CONH-(AA)_n-COOH与N-羟基琥珀酰亚胺反应成活泼酯CH₃O-PEG-OCH₂CONH-(AA)_n-COOSu，后者再与rhIL-2分子中的游离氨基连接，形成偶合物CH₃O-PEG-OCH₂CONH-(AA)_n-CONH-(rhIL-2)(I)。