[发明专利]一种异体神经移植物、其制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种神经移植材料、其制备方法及其应用，尤其涉及一种彻底去除了引起排斥反应的施旺细胞、轴突和髓鞘，但同时其基底膜管仍保持完整的异体神经移植物，以及该异体神经移植物在临床上的应用，属于医学领域。

背景技术

周围神经缺损的修复是一临床难题，其治疗重点应解决两个问题，一是神经缺损的桥接修复，另一个是神经纤维与远端靶器官的选择性对接。目前在临床治疗过程中解决神经缺损的手段依然以自体神经移植为标准手术，但由于自体神经来源有限且造成供区较多并发症，多年来医学界不断寻找能替代自体神经移植的生物材料。理想的替代材料应具有与正常神经相似的物理和生化特性，包括正常神经轴突再生所需细胞外基质及三维空间管道结构。自体骨骼肌、自体静脉等生物源性材料及硅胶管、藻酸盐凝胶、PGA、PLA等人工合成材料都作为替代材料被研究，但其结构与神经基底膜有很大的不同，故临床应用价值不大。新鲜同种异体神经移植来源相对广泛且不用牺牲自体神经，但因其存在免疫排斥反应，常导致手术失败。理想的替代材料应具有与正常神经相似的物理和生化特性，包括正常神经轴突再生所需细胞外基质及三维空间管道结构。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种新的异体神经移植物。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术途径来实现的：

一种异体神经移植物，该异体神经移植物彻底去除了引起排斥反应的施旺细胞、轴突、髓鞘，其基底膜管保持完整。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种制备上述异体神经移植物的方法。

本发明所要解决的另一个技术问题是通过以下技术途径来实现的：

一种制备异体神经移植物的方法，步骤如下：

1)无菌条件下，去除人周围神经的外膜脂肪及结缔组织；

2)将去除了外膜脂肪及结缔组织的人周围神经浸泡于蒸馏水中，在10-40℃温度下振荡冲洗12小时以上；

3)将经过步骤2)处理的人周围神经浸泡于由SB-10与磷酸盐缓冲液(PBS)二者按任意比例配制成的萃取液1中振荡冲洗12小时以上；

4)将经过步骤3)处理的人周围神经用PBS溶液冲洗20分钟以上；

5)将经过步骤4)处理的人周围神经用由Triton X-200、SB-16和PBS三者按任意比例配制的萃取液2中振荡冲洗12小时以上；

6)依次重复3)、4)、5)步骤一次；

7)将人周围神经用PBS溶液冲洗20分钟以上，即得。

作为优选的，上述方法中，步骤2)中将去除了外膜脂肪及结缔组织的人周围神经浸泡于蒸馏水中在25℃温度下振荡冲洗24小时；

步骤3)中所述萃取液1的配制方法如下：将SB-10溶解于0.01M的PBS液中配制成125375mM的SB-10溶液；所述的振荡冲洗时间优选为24小时；

步骤4)中将经过步骤3)处理的人周围神经用0.01M PBS溶液冲洗30分钟；

步骤5)中所述萃取液2的配制方法如下：将Triton X-200在0.01M PBS稀释成0.14-0.42％的浓度，同时将SB-16溶解于此溶液中，配制成0.6-1.8mM的SB-16；所述的振荡冲洗时间优选为24小时；

步骤7)中将人周围神经用0.01MPBS溶液冲洗30分钟。

本发明中所用到试剂，例如TrionX-200、SB-10、SB-16都能从商业途径购买得到(例如，可购自Sigma公司)。

本法制备得到的移植物采用冷冻干燥法存储，包括-20℃冷冻干燥大于4小时及采用γ射线辐照灭菌，具体方法如下：将本发明化学萃取法得到的去细胞神经放置铝板上在-80℃的深低温冰箱中进行速冻，保持神经的外形，然后在冷冻干燥机(Edwards)中-56℃下进行冷冻干燥12小时。用无毒塑料包装袋进行双层封装，250万拉德γ射线辐照灭菌，4℃冰箱保存备用。

本发明采用化学萃取方法去除细胞异体神经移植物，所制备得到的异体神经移植物不但去除了引起排斥反应的主要抗原-细胞、轴突和髓鞘，而且保存了轴突再生所需细胞外基质及三维空间管道结构，为轴突的再生保存了诱导和促进物质及提供完整的再生支架。本发明异体神经移植物具有与正常神经相似的物理和生化特性，组织学检查发现，经本发明方法制备得到的异体神经移植物的植物细胞、轴突、髓鞘被彻底去除，神经基底膜管基本保持完整。