[发明专利]单胺氧化酶诊断试剂盒及单胺氧化酶活性浓度的测定方法

权利要求书

1.一种酶循环扩增法(Enzymatic Recycling Method)的单胺氧化酶活性浓度测定方法，其方法原理如下：

胺类化合物+2水+氧 单胺氧化酶 相应醛类产物+

                      氨离子+过氧化氢+2 OH^-

氨离子+α-酮戊二酸+还原型辅酶 谷氨酸脱氢酶 谷氨酸

                                         +辅酶+水

谷氨酸+水+氧 谷氨酸氧化酶 氨离子+α-酮戊二酸+

                                     过氧化氢

胺类化合物可以是苄胺、对苯甲胺-β-偶氮萘酚、丁基胺、戊基胺、β-苯乙基胺、酪胺、5-羟色胺等或其衍生物。

将最终反应物置于紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度下降的速度，测算出单胺氧化酶活性浓度大小测定结果。

单胺氧化酶(Monoamine Oxidase EC 1.4.3.4、EC 1.4.3.6)作为作用酶，功能为将胺类化合物酶解产生氨。

谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase EC 1.4.1.2、EC 1.4.1.3或EC 1.4.1.4)、谷氨酸氧化酶(Glutamate oxidase EC 1.4.3.7、EC1.4.3.11)作为循环酶：谷氨酸脱氢酶的酶促作用产生谷氨酸；谷氨酸氧化酶再将谷氨酸再次变回氨及α-酮戊二酸，使氨不断地被重复循环利用。

谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase EC 1.4.1.2、EC 1.4.1.3或EC 1.4.1.4)作为显色酶，使还原型辅酶变成为辅酶，在340nm波长下发生吸光度下降，从而可以测算出单胺氧化酶活性浓度。

还原型辅酶可以是NADPH、NADH或thio-NADH中的一种。

2.一种单胺氧化酶诊断试剂盒，主要成分包括：

缓冲液          40-500mmol/L

稳定剂          1-50mmol/L

还原型辅酶      0.1-0.35mmol/L

谷氨酸脱氢酶    2000-500000U/L

谷氨酸氧化酶    2000-500000U/L

α-酮戊二酸     2-20mmol/L

其特征在于：试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；

也可以配制成液体试剂，直接使用。

3.根据权利要求2所述单胺氧化酶诊断试剂盒，其特征在于：

由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、α-酮戊二酸、、谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase EC 1.4.1.2、EC 1.4.1.3或EC 1.4.1.4)、谷氨酸氧化酶(Glutamate oxidase EC 1.4.3.7、EC 1.4.3.11)组成单剂试剂。

4.根据权利要求2所述单胺氧化酶诊断试剂盒，其特征在于：

由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、α-酮戊二酸、谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase EC 1.4.1.2、EC 1.4.1.3或EC 1.4.1.4)、谷氨酸氧化酶(Glutamate oxidase EC 1.4.3.7、EC 1.4.3.11)组成双剂试剂；试剂1，由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、α-酮戊二酸组成；试剂2，由缓冲液、稳定剂、谷氨酸氧化酶、谷氨酸脱氢酶组成。α-酮戊二酸、谷氨酸脱氢酶、谷氨酸氧化酶在试剂1或试剂2中的位置可以不限。