[发明专利]同型半胱氨酸诊断试剂盒及同型半胱氨酸浓度测定方法

权利要求书

1.一种同型半胱氨酸浓度测定方法，其方法原理如下：

同型半胱氨酸+腺苷基蛋氨酸  同型半胱氨酸甲基转移酶腺苷基同型半胱氨酸+蛋氨酸

腺苷基同型半胱氨酸+氧+水  氨基酸氧化酶  腺苷基硫代丁酮酸+氨+过氧化氢

蛋氨酸+氧+水 氨基酸氧化酶  含氧酸+氨+过氧化氢

2氨离子+2α-酮戊二酸酯+2还原型辅酶  谷氨酸脱氢酶2谷氨酸+2水+2辅酶

腺苷基硫代丁酮酸(S-adenosyl-γ-thio-ketobutyrate)含氧酸(oxo-acid)

将最终反应物辅酶置于紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度下降的大小程度，测算出同型半胱氨酸浓度大小测定结果。

本发明测定同型半胱氨酸浓度的方法，其还原型辅酶可以是NADPH、NADH或thio-NADH中的一种。

2.一种同型半胱氨酸诊断试剂盒，主要成分包括：

缓冲液                    20-500mmol/L

稳定剂                    1-50mmol/L

同型半胱氨酸甲基转移酶    200-500000U/L

氨基酸氧化酶              200-500000U/L

谷氨酸脱氢酶              200-500000U/L

S-腺苷基蛋氨酸        0.1-20mmol/L

α-酮戊二酸酯         0.1-20mmol/L

还原型辅酶            0.15-0.35mmol/L

其特征在于：试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

3.根据权利要求2所述同型半胱氨酸诊断试剂盒，其特征在于：由缓冲液、稳定剂、S-腺苷基蛋氨酸(S-adenosyl-L-methionine)、同型半胱氨酸甲基转移酶(homocysteine S-methyltransferase EC2.1.1.10)、氨基酸氧化酶(Amino Acid Oxidase EC 1.4.3.2、EC1.4.3.3)、谷氨酸脱氢酶(EC 1.4.1.2)、α-酮戊二酸酯、还原型辅酶组成单剂试剂。

4.根据权利要求2所述同型半胱氨酸诊断试剂盒，其特征在于：由缓冲液、稳定剂、S-腺苷基蛋氨酸(S-adenosyl-L-methionine)、同型半胱氨酸甲基转移酶(homocysteine S-methyltransferase EC2.1.1.10)、氨基酸氧化酶(Amino Acid Oxidase EC 1.4.3.2、EC1.4.3.3)、谷氨酸脱氢酶(EC 1.4.1.2)、α-酮戊二酸酯、还原型辅酶组成双剂试剂；试剂1，由缓冲液、稳定剂、氨基酸氧化酶、谷氨酸脱氢酶、α-酮戊二酸酯、还原型辅酶组成；试剂2，由缓冲液、稳定剂、同型半胱氨酸甲基转移酶、S-腺苷基蛋氨酸组成。S-腺苷基蛋氨酸、同型半胱氨酸甲基转移酶、氨基酸氧化酶、谷氨酸脱氢酶、α-酮戊二酸酯、还原型辅酶在试剂1或试剂2中的位置可以不限。

5.根据权利要求2所述同型半胱氨酸诊断试剂盒，其特征在于：由缓冲液、稳定剂、S-腺苷基蛋氨酸(S-adenosyl-L-methionine)、同型半胱氨酸甲基转移酶(homocysteine S-methyltransferase EC2.1.1.10)、氨基酸氧化酶(Amino Acid Oxidase EC 1.4.3.2、EC1.4.3.3)、谷氨酸脱氢酶(EC 1.4.1.2)、α-酮戊二酸酯、还原型辅酶组成多剂试剂；试剂1，由缓冲液、稳定剂、α-酮戊二酸酯、还原型辅酶组成；试剂2，由缓冲液、稳定剂、谷氨酸脱氢酶、氨基酸氧化酶组成；试剂3，由缓冲液、稳定剂、同型半胱氨酸甲基转移酶、S-腺苷基蛋氨酸组成。S-腺苷基蛋氨酸、同型半胱氨酸甲基转移酶、氨基酸氧化酶及谷氨酸脱氢酶、α-酮戊二酸酯、还原型辅酶在试剂1、试剂2或试剂3中的位置可以不限。

6.根据权利要求2所述同型半胱氨酸诊断试剂盒，其特征在于：还包括稳定剂1-4000mmol/L或0.1％-100％体积比。所述稳定剂为：硫酸铵(Ammonia Sulfate)、甘油(Glycerol)、丙二醇(Propylene Glycol)、乙二醇(Ethylene glycol)及防腐剂中的至少一种。