[发明专利]O型口蹄疫病毒多表位粘膜免疫疫苗及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及用于粘膜免疫的融合蛋白，用于预防口蹄疫，其由O型口蹄疫病毒主要胞膜蛋白VP1的多个抗原表位、大肠杆菌不耐热毒素B亚单位、T细胞抗原表位及纯化标签序列组成，及其制备方法及应用。

背景技术

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄动物的急性、高度传染性疾病，位列动物A类传染病之首，猪和牛的临床表现最为严重，幼龄动物可因心肌炎而死亡。该病的主要传播途径是经呼吸道感染，对畜牧业都构成了巨大的威胁，也造成了巨大的损失。口蹄疫病毒属小RNA病毒科口蹄疫属，有七个血清型，即O、A、C、Asia I、SAT1、SAT2、SAT3，其中，前4种属于同一亚群，后3种属同一亚群。传统上使用疫苗来进行预防，所用疫苗包括基因工程疫苗、灭活或减毒病毒疫苗、合成肽疫苗、活载体病毒疫苗、核酸疫苗及抗独特型抗体疫苗等(Balamurugan V，Acta Virol.2004；48(4)：201-214)。无论是灭活疫苗还是减毒疫苗，在使用中都存在病毒重组形成新毒株的可能，因此有一定的潜在危险；合成肽疫苗，由于合成肽分子较小，空间构象简单，因而对免疫系统的刺激强度不够，保护率低；在亚单位疫苗方面，主要针对位于衣壳表面的VP1、VP2、VP3等蛋白进行了广泛试验，在酵母中表达结构蛋白基因p1可以作为一种安全有效且价格低廉的新型疫苗(Balamurugan V，Virus Res.2003；92(2)：141-9)，在苜蓿中表达VP1，将其提取物，或含有表达产物的苜蓿本身，饲喂动物，均可产生免疫保护(Wigdorovitz A，Virology.1999；255(2)：347-53)。尽管亚单位疫苗非常安全，但免疫效果并不理想，另外亚单位疫苗不具有感染性，因而其激活的免疫反应较弱；而重组病毒载体疫苗有着其他疫苗不可比拟的优势，用于表达口蹄疫病毒抗原的病毒载体主要有痘苗病毒、腺病毒、核心多角体病毒及烟草花叶病毒等，但迄今为止，重组病毒疫苗仍然处于研究和探索阶段。Moraes构建含有P1区及3C蛋白酶编码区的复制缺陷型5型腺病毒载体，单次接种给猪，在随后的7，14，42天给以病毒攻击，全部获得保护(Moraes MP，Vaccine.2002；20(11-12)：1631-9)。此外，DNA疫苗的研究也是一个热点，Wong采用VP1蛋白中的两个区域，即第141-160位和第200-213位的氨基酸序列，与宿主(小鼠、猪)自己的IgG融合，免疫效果优于蛋白疫苗(WongHT，Virology.2000；278(1)：27-35)，但DNA疫苗诱导的抗体反应比常规疫苗低。而且，自基因疫苗开始研究起，始终伴随着外源DNA有可能整合到宿主基因组中，外源抗原持续表达可能产生不良后果，质粒DNA可能诱导自身免疫反应，质粒DNA上携带的抗原基因不可调控等安全性问题。

近年兴起的粘膜免疫，不仅可以产生很强的抗体应答，而且还能产生较好的细胞免疫效果。尤其是口蹄疫病毒的主要传播途径是呼吸道传播，故粘膜免疫应该成为第一防线。粘膜免疫需要有粘膜佐剂分子，已经证实霍乱毒素B亚单位(本文简称为CTB)、大肠杆菌不耐热毒素B亚单位(本文简称为LTB)均是良好的佐剂分子(Lycke N，European J.of Immunol，1992；22：2277-2281)。此外，Blanco的研究发现，含有T细胞表位的多肽能增强Th细胞的活性，并协同诱导机体产生抗病毒抗体(Blanco E，J Virol.2001；75(7)：3164-74)。

目前，尚没有见到针对口蹄疫的粘膜免疫疫苗，更未有良好疗效的针对口蹄疫病毒的多表位粘膜免疫疫苗。为了有效预防口蹄疫，人们迫切需要一种新型、高效的疫苗来预防口蹄疫。本发明提供了一种新的能用于粘膜免疫的融合蛋白及其疫苗组合物，其能预防口蹄疫病毒的感染。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种新的能用于粘膜免疫的融合蛋白及其疫苗组合物，其能预防口蹄疫病毒的感染。本发明还提供了含有所述融合蛋白的药物组合物，如疫苗组合物。此外，本发明还提供了编码所述融合蛋白的多核苷酸以及制备该融合蛋白的方法等。