[发明专利]模拟病毒型轮状病毒基因疫苗及其制备方法

权利要求书

1、一种模拟病毒型轮状病毒基因疫苗，其特征在于：所述疫苗是颗粒性肽-DNA复合物，它包含有1～3个含α-病毒复制酶cDNA的轮状病毒结构蛋白真核质粒表达载体，该复合物的颗粒性肽为霍乱毒素B亚单位与富含正电荷的18赖氨酸多聚物K₁₈的偶联物。

2、一种模拟病毒型轮状病毒基因疫苗制备方法，其特征在于，依次通过下列步骤合成：

(1)用常规方法构建轮状病毒结构蛋白真核质粒pShame 2a的表达载体；

(2)CTB用SPDP修饰；带正电荷的18赖氨酸多聚物K₁₈先用SPDP修饰，再进一步与DTT作用1h；透析，以去除游离的SPDP与DTT；修饰后的CTB与K₁₈按质量比为1∶2的比例混合，室温作用18h；最后进行透析，得到CTB-K₁₈耦联物；

(3)理论计算质粒与CTB-K₁₈偶联物的电荷数，由于CTB-K₁₈偶联物含有18个K残基，记为18e+；而每个脱氧核糖核酸的平均分子量为330Da，含1个磷酸根，记为1e-；CTB-K₁₈偶联物以1∶1或2∶1的电荷比与质粒进行混合；

(4)在浓度为150mM或87.5mM的NaCl条件下，将CTB-K₁₈溶液逐滴滴入等体积的涡旋状态含有500μg/ml DNA的水溶液中，形成电荷比为1或2的CTB-K₁₈-DNA复合物。

上述方法中，轮状病毒结构蛋白真核质粒pShame 2a含有CMV启动子和α病毒复制酶cDNA基因；CTB为霍乱毒素B亚单位，SPDP为Sigma公司产品：succinimidyl3-(2-pyridyldithio)propionate；二硫苏糖醇dithiothreitol，简称DTT。