[发明专利]一种培养海洋光合细菌光－暗发酵耦联制氢的方法

权利要求书

1.一种培养光发酵细菌光-暗发酵耦联制氢的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)光培养产氢：

①富集培养：取样以10-50ml的污泥样品接种到50-500ml培养液中富集培养，培养箱温度为28-35℃，光照强度为2500-4000勒克斯，无氧条件培养3-5天；而后重复上述富集培养2-3次，直到富集培养液变成红色；

②产氢培养：将富集培养后的接种物划线挑取单菌落，培养至含有产氢培养基的培养皿中可产氢，培养条件：每升样品中加入1-2克醋酸钠或1-2克丁酸钠，培养温为28-32℃，pH为7.5-8.2，光照强度为2500-4000勒克斯，同时保持无氧状态；

2)暗培养产氢：

①预处理：将污泥或污水样品通过碱性或酸性溶液调节其PH值，而后将样品静止0.5-1.5小时备用；

②培养产氢：将2)①预处理得到的菌种接种到海水养殖场污水或污泥中培养放氢，其培养条件为：反应温度28-35℃，光照强度为2500-4000勒克斯；

3)光-暗产氢耦联放氢：

将步骤1)①中得到的光合细菌加入到步骤2)②中继续放氢，其反应条件为：反应温度控制在28-35℃，光照强度控制在2500-4000勒克斯。

2.按权利要求1所述培养光合细菌光-暗发酵耦联制氢的方法，其特征在于：所述富集培养中的培养基为：氯化铵1.0-2.0g、乙酸钠2.0-4.0g、酵母粉0.2g-1.0g、蛋白胨0.1-0.5g、碳酸氢钠1-2g、海水1000ml、PH7.5-8.2。

3.按权利要求2所述培养光合细菌光-暗发酵耦联制氢的方法，其特征在于：所述权利要求2富集培养基中的乙酸钠可用丁酸钠替换。

4.按权利要求1所述培养光合细菌光-暗发酵耦联制氢的方法，其特征在于：所述产氢培养中的培养基为：谷氨酸钠1.0-2.0g、乙酸钠2.0-4.0g、酵母粉0.2g-1.0、蛋白胨0.1-0.5g、碳酸氢钠1-2g、海水1000ml、PH7.5-8.2。

5.按权利要求4所述培养光合细菌光-暗发酵耦联制氢的方法，其特征在于：所述权利要求4产氢培养基中的谷氨酸钠可用D、L-苹果酸替换，乙酸钠可用丁酸钠替换。

6.按权利要求1所述培养光合细菌光-暗发酵耦联制氢的方法，其特征在于：步骤2)暗培养产氢预处理中所述碱溶液为：氢氧化钠溶液，将其pH值调节到10-14；酸溶液为：盐酸溶液，将其pH值调节到1-4。

7.按权利要求1所述培养光合细菌光-暗发酵耦联制氢的方法，其特征在于：步骤1)和2)中所述样品为海水养殖场的污泥和污水。

8.按权利要求1所述培养光合细菌光-暗发酵耦联制氢的方法，其特征在于：步骤1)所述的光培养产氢中的产氢细菌可为：沼泽红假单胞菌，荚膜红假单胞菌或类球红细菌。

9.按权利要求1所述培养光合细菌光-暗发酵耦联制氢的方法，其特征在于：步骤2)所述的暗培养中的光合细菌可为：巴氏芽孢梭菌、类腐败梭菌、丁酸梭菌或阴沟肠杆菌。