[发明专利]一种检测血清中乙肝病毒核心抗原的酶联免疫测定试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种试剂盒，尤其涉及一种检测血清中乙肝病毒核心抗原的酶联免疫测定试剂盒。

背景技术

乙型肝炎患者血清中存在三种形式的病毒颗粒，最多见的是直径约为17～25nm的小球形颗粒，而稍微少一些的是直径约为20～22nm、长度不一的管状或丝状颗粒，这两种颗粒属于亚病毒结构，均为过剩的病毒外壳，仅含乙肝病毒表面抗原而不含有HBV DNA，因此无感染性，还有一种病毒颗粒直径约为42nm，外层为HBV表面抗原(HBsAg)组成的包膜，内层是HBV核心抗原(HBcAg)构成的核衣壳，后者包裹HBV基因组和相关的聚合酶，这类病毒颗粒被称作丹氏颗粒(Dane particle)，是一种完整的可复制的乙肝病毒颗粒。由于HBcAg主要存在于乙肝病毒丹氏颗粒的核心和乙肝患者的肝细胞核内，因此被认为是乙肝病毒复制的直接指标，但血清内极少有游离的HBcAg存在，所以用常规方法难以检出。

有人曾报道过直接检测血清中HBcAg的方法，该方法将多克隆乙肝表面抗体和多克隆乙肝核心抗体同时包被到微孔板上，乙肝表面抗体与乙肝病毒丹氏颗粒上的表面抗原结合，然后在微孔板上加入裂解剂，丹氏颗粒裂解暴露出HBcAg，游离的HBcAg被预包被在微孔板上的多克隆乙肝核心抗体所吸附，再在微孔板中加入辣根过氧化物酶标记的多克隆乙肝核心抗体，过氧化物酶与后续加入的底物反应，最终达到检测HBcAg的目的。后来又有人对这一方法进行了改进，是将包被原料改换为单克隆乙肝表面抗体和单克隆乙肝核心抗体，酶结合物也改为酶标单克隆乙肝核心抗体，同时加入一步抗原与抗体结合的促进过程，增强了检测的灵敏度。

上述两种方法，其原理都是先将乙肝病毒丹氏颗粒固定在微孔板上，然后使其裂解释放出HBcAg，从而实现对HBcAg的检测，但在实际检测过程中，由于一些体内存在乙肝病毒复制的患者血清中含有很高浓度的乙肝亚病毒颗粒，这些亚病毒颗粒与丹氏颗粒竞争结合微孔板上的乙肝表面抗体，因此在一定程度上会抑制丹氏颗粒与微孔板的结合，最终降低了HBcAg检测的灵敏度，成为该类检测方法的应用障碍。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，研究设计一种操作简便、能达到实际临床检验要求的检测血清中乙肝病毒核心抗原的酶联免疫测定试剂盒。

本发明提供了一种可检测血清中乙肝病毒核心抗原的酶联免疫测定试剂盒。

本发明提供的乙肝病毒核心抗原酶联免疫测定试剂盒，其主要组分为：单克隆乙肝核心抗体预包被的微孔板，由1～10％(质量百分比)的SDS、0.5～5％(体积百分比)的Tween-60、0.1～1％(体积百分比)的巯基乙醇、0.05～0.2M、PH7.4的磷酸盐缓冲液组成的样本处理剂，辣根过氧化物酶标记的多克隆乙肝核心抗体；其次要组分为：阳性对照液、阴性对照液、20倍浓缩洗涤液、底物液A、底物液B及终止液。

本发明的技术方案是：于血清样本中加入样本处理剂，然后置于70℃环境中温育1小时，应用该方法处理之后，一方面血清中的抗-HBc抗体发生变性而失去与HBcAg特异性结合的能力，另一方面血清中的乙肝病毒丹氏颗粒被裂解而释放出游离的HBcAg，但HBcAg经过该方法处理之后也会发生变性。处理后的血清样本加入到有单克隆乙肝核心抗体预包被的微孔板中，样本中变性的HBcAg被单克隆乙肝核心抗体吸附，形成固相HBcAg·单克隆乙肝核心抗体免疫复合物，该复合物中的HBcAg可与加入的辣根过氧化物酶标记的多克隆乙肝核心抗体结合，形成双抗体夹心，辣根过氧化物酶与后续步骤中加入的底物反应，最终达到检测乙肝核心抗原的目的。

乙肝病毒核心抗原酶联免疫测定试剂盒中各组分的具体制备过程如下：

一、单克隆乙肝核心抗体预包被微孔板的制备

1、包被

Na₂CO₃            1.6g

NaHCO₃            2.9g

去离子水          1000ml

调整PH至9.6，加入适量单克隆乙肝核心抗体，混匀后按每孔100ul的量加入到微孔板各孔中，于4℃环境下放置过夜，然后甩去孔内液体，拍干。

2、洗涤

NaHPO₄.12H₂O       3.72g

KH₂PO₄             0.43g

NaCl               6.8g