[发明专利]类固醇激素合成急性调节蛋白在制备防治脂肪肝药物中的用途

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域，涉及一种胆固醇转运蛋白-类固醇激素合成急性调节蛋白的新用途，具体涉及类固醇激素合成急性调节蛋白在降低肝细胞脂肪沉积药物中的用途。

背景技术

肝内脂肪沉积是脂质代谢紊乱引起的严重的并发症，如果不能及时纠正脂质代谢紊乱，将会进一步发展为脂肪肝、肝脏纤维化和肝硬化等病变，严重影响人们的生活质量。据有关统计，严重的高甘油三酯血症和混合性高脂血症的患者，其脂肪肝的发病率较正常人高5-6倍。通常，肝脏摄取游离脂肪酸后使之转变成甘油三酯，甘油三酯再与特异的载脂蛋白结合生成极低密度脂蛋白。当肝内甘油三酯排泄障碍，便形成肝内脂质储积，即临床上常见的脂肪肝。目前临床上尚无有效的针对脂肪肝的治疗药物，因此，寻找有效的干预药物有着重要的理论意义和应用价值。

类固醇激素合成急性调节蛋白(Steroidogenic acute regulatory protein，StAR)是促进胆固醇由线粒体外膜转入线粒体内膜的重要转运体(Lin D，Sugawara T，Strauss JF，III，Clark BJ，Stocco，DM，Saenger P，Rogol A，Miller WL，1995，Science.267：1828-1831)。近年来有研究表明，StAR在肝细胞胆汁酸酸性合成途径起关键作用，胆固醇由StAR转运至线粒体后，在线粒体内膜细胞色素氧化酶(CYP27A1)的作用下生成27-羟化胆固醇等氧化固醇(oxysterol)，从而增加胆汁酸合成，加快胆固醇排泄(Ren S，Hylemon PB，Marques D，Gurley E，Bodhan P，Hall E，Redford K，Gil G，Pandak WM，2004，Hepatology.40：910-917)。现有技术对StAR的研究均局限于类固醇激素合成组织中，关于其在胆固醇等脂质代谢中的作用未见有相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供类固醇激素合成急性调节蛋白新的药用用途，具体涉及其在制备防治脂肪肝药物中的用途。

类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)是一种胆固醇转运蛋白，可将胆固醇由线粒体外膜转入线粒体内膜，胆固醇可进一步在线粒体内膜细胞色素氧化酶的作用下生成调节性氧化固醇，可调节脂质代谢关键基因的表达，维持胆固醇代谢平衡。

本发明通过动物实验，证实了类固醇激素合成急性调节蛋白在小鼠肝脏内过表达，以及进一步产生的降低肝细胞中脂肪沉积的用途。

本发明采用apoE基因敲除小鼠复制高血脂动物模型，以携带人StAR全长cDNA序列的腺病毒(Pandak WM，Ren S，Marques D，Hal l E，Redford K，Mal loneeD，Bohdan P，Heuman D，Gil G，Hylemon P，2002，J Biol Chem.277(50)：48158-48164)为载体，采用尾静脉注射腺病毒的方法在小鼠肝脏内过表达StAR，采用逆转录聚合酶法(RT-PCR)及蛋白质免疫印迹实验(Westernblot)的方法证实小鼠肝脏内StAR mRNA及蛋白的过表达；采用血脂检测试剂盒检测肝组织中甘油三酯和胆固醇的含量；进一步采用冰冻切片技术制备小鼠肝脏组织切片，用油红O染色方法显示小鼠肝脏组织中脂肪含量。结果表明，在正常饮食的情况下，24周龄的apoE基因敲除小鼠与同遗传背景的C57BL/6J小鼠相比，血脂明显升高；经过尾静脉注射腺病毒载体可以在小鼠肝脏内过表达StAR的mRNA和蛋白；注射病毒140小时后，利用血脂检测试剂盒显示，注射含StAR基因病毒的小鼠肝组织中甘油三酯和胆固醇的含量较注射生理盐水组以及注射空载体组明显降低；并且利用油红O对肝组织冰冻切片染色显示其脂类物质明显较其它2组减少。因此证实StAR可减轻肝细胞中脂肪沉积。

本发明的目的通过下述方法和步骤实现

1、建立小鼠高血脂模型

正常饮食饲喂apoE基因敲除小鼠；

采用血脂检测试剂盒检测小鼠血脂，包括总胆固醇，甘油三酯，高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇。

2、小鼠肝脏内过表达StAR

小鼠随机分生理盐水组、空载体组和过表达StAR组三组；

通过尾静脉注射腺病毒表达载体。

3、小鼠肝脏内StAR过表达的鉴定

注射病毒140小时后，处死小鼠，取小鼠肝组织冻存留用；

逆转录聚合酶法(RT-PCR)鉴定StAR mRNA在肝脏内的过表达：

设计引物：

StAR基因的扩增引物