[发明专利]一种SARS冠状病毒多肽抗原及其应用

说明书

背景技术

非典型肺炎(SARS)是由一种新发现的冠状病毒(severe acuterespiratory syndrome associated coronavirus，Nidovirales；Coronaviridae；Coronavirus；Group 2species)所引起。病毒的基因组由一条单链RNA组成，其中包含有14个开放式阅读框(ORF)。目前已知病毒编码的蛋白质包括：脂双层膜及其上的棒状膜蛋白S、包膜蛋白E、膜糖蛋白M、以及膜内部衣壳蛋白N，以及一些蛋白酶和复制酶，然而大多数的ORF是否编码蛋白质，以及他们的功能都不清楚(Rota PA，Oberste MS，The genome sequence ofthe ARS-associated coronavirus.Science.2003May 30；300(5624)：1399-404)。

ORF3a最近研究比较集中的SARS病毒基因之一。ORF3a(例如：序列为SEQ ID NO：4)编码了一个全长274个氨基酸的全新病毒蛋白(例如：序列为SEQ ID NO：5)，已有研究人员通过免疫印迹和蛋白质质谱的方法证明了这一病毒蛋白的存在，并推测其很可能是病毒的结构蛋白。通过生物信息学分析，该蛋白具有3个跨膜区，与其他已知蛋白的同源性很低(吴家睿，曾嵘等，申请号：200310108604.X)。虽然通过很多不同的实验方法都证明了3a蛋白的存在，但是关于这一蛋白功能的研究还很少，而现有的文献都没有能够阐明该蛋白在病毒周期中的作用。(Naoto Ito，Eric C.Mossel，KrishnaNarayanan，Vsevolod L.Popov，et al.，Severe acute respiratory syndromecoronavirus 3a protein is a viral structural protein，2005，J.Virol.79，3182-3186)。同时，也未见有利用其全蛋白或者部分多肽序列作为抗原免疫动物的报道。

目前通常使用的SARS临床检测手段如PCR检测病毒DNA等方法可靠性低、操作性差，操作不够方便。且目前的SARS免疫检测的检测成本较高。(Poon，Leo L.M.，Chan，Kwok Hung，et al.Early diagnosis of SARScoronavirus infection by real time RT-PCR.J.Clin.Virol.2003，28，233-238)。

发明内容

所要解决的技术问题

本发明需要解决的技术问题为了克服上述缺陷，提供一系列强免疫原性的多肽抗原及其多克隆、单克隆抗体，同时指明其检测SARS冠状病毒抗体或者抗原的方法。

技术方案

本发明的技术方案之一提供是一种SARS冠状病毒多肽抗原，其特征在于，该多肽抗原具有适合于制备抗体的免疫原性，并具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，或者具有SEQ ID NO：1经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的氨基酸序列。特别地，所述的抗体为具有病毒和抗原特异性的多克隆抗体或单克隆抗体。

上述的SARS冠状病毒多肽抗原的一种优选方案为，与序列表中SEQ IDNO：4所述序列中的10-72位的碱基所编码蛋白质序列SEQ ID NO：5同源。

本发明的技术方案之二为提供一种抗体，该抗体特异性地与技术方案之一所述的SARS冠状病毒多肽抗原结合。

上述的抗体的一种优选方案为，该抗体是技术方案之一的SARS冠状病毒多肽抗原的多克隆抗体，且由下列制备方法所制备，步骤包括：

(1)提供技术方案之一所述的多肽；

(2)将多肽与载体蛋白偶连，并与佐剂一起免疫动物；

(3)取动物的抗血清过抗原偶连的亲和层析柱纯化，即得到所述的抗体。

上述的抗体的另一种优选方案为，该抗体是技术方案之一的SARS冠状病毒多肽抗原的单克隆抗体，是由下列制备方法所制备的，步骤包括：

(1)提供技术方案之一所述的多肽；

(2)将多肽与载体蛋白偶连，并与佐剂一起免疫小鼠；

(3)分离小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞株融合；

(4)加入小鼠腹腔饲养细胞与融合细胞共培养，并筛选阳性株；

(5)克隆化筛选，即可获得单克隆抗体细胞株；

(6)将单克隆抗体细胞株植入小鼠体内，分泌所需要的单克隆抗体。