[发明专利]一种三萜类化合物的提取、制备方法

说明书

技术领域

本发明属于植物化学技术领域，具体涉及一种三萜类化合物Colosolicacid(CRA)的提取、制备方法。

背景技术

Colosolic acid(CRA)是一种天然产物，其主要存在于植物Lagerstroemiaspeciosa的叶子中。在东南亚，该种植物的叶子一直被作为草药治疗糖尿病、控制肥胖而广泛使用。菲律宾的塔加路族人称此植物为Banaba，因而得名“巴拿巴”。经研究表明CRA是Banaba的主要活性成分，相关报道证明CRA可以降低试验白鼠的血糖并对患有遗传糖尿病的试验白鼠有降血糖作用，CRA可以活化葡萄糖的传输，因此可以降低血糖，具有治疗糖尿病、减肥的作用，誉有为植物胰岛素一称，可应用于药品、食品、保健食品等领域。因此研究开发CRA的提取制备方法具有重要的现实意义。

关于CRA的制备提取目前报道很少，Banaba植物在东南亚作为当地草药有所应用，但在国际学术研究中，没有对CRA的药代动力学研究，也没有报道相关对人体作用试验。CRA作为纯天然的植物提取物，已在东南亚人民长期应用中证实其药用价值，但是对CRA的制备提取尚无有效的方法。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题在于研究一种从Banaba提取CRA产品的生产方法，并且环保安全、周期短、操作简单、能工业化生产的工艺。

本发明提供了一种三萜类化合物Colosolic acid(CRA)的提取制备方法。

本发明方法将Banaba叶经水提、醇提，最大限度提取CRA，提取液经1-0.45微米膜过滤器过滤，除去未溶解的杂质。采用大孔型非极性或弱极性树脂作为填充料装柱，在20～60℃下，对提取液中的CRA进行吸附，并用梯度区间在40％～95％的低级醇溶液解吸，收集含CRA的馏分，将收集得到的馏分真空浓缩至含固量为25％时进行冷冻干燥，将浓缩液进行冷冻干燥后制得成品，该成品经HPLC检测，CRA产品含量在20～60％。

本发明的方法具体包括下列步骤：

(1)将Banaba叶子浸没于8-10倍量的无毒的低级(C₂-C₃)醇中提取提取3次，每次2-3小时；

(2)将提取液用0.1-0.5μ微滤膜过滤，滤液合并通过大孔吸附树脂；

(3)将吸附饱和的大孔吸附树脂用梯度的无毒低级醇冲洗，控制流量4-5BV/h，将CRA解吸出来，解吸液通过HPLC检测，收集富含CRA部分；

(4)解吸液经80℃真空浓缩、冷冻干燥，得到CRA产品，用HPLC检测，含量在20～60％。

本方法采用的是采用大孔型非极性或弱极性吸附树脂对CRA进行吸附分离，利用大孔非极性或弱极性树脂队CRA的吸附和在合适浓度的低级醇条件下能够洗脱出CRA的原理。有效地富集了CRA，可以将所得产品中的CRA含量提升到20～60％，理论收率在80％～90％。

本发明方法具有工艺简单、产物纯度高、生产周期短、成本低的优点。采用本发明方法提取制备的CRA产品经HPL检测纯度为20％～60％。

附图说明：

图1CRA产品的HPLC检测，图中保留时间为12.146min的峰为CRA信号。

具体实施例

实施例一.

称取Banaba叶子500g，用8倍量40％乙醇4升，回流提取4次，每次用乙醇4L，各提取60分钟，合并提取液，将提取液用0.1μ微滤膜过滤。取清洗干净的D101树脂300g装柱，将提取液通过该树脂，流速3BV/h。首先用1L的40％乙醇，冲洗树脂；然后用1.5L的80％乙醇以3BV/h的流速洗脱CRA，收集该流份。将洗脱液在60□下真空浓缩至约500ml，然后将浓缩液冷冻干燥。得到CRA粉末，称重为9.72g，经HPLC外标法检测，CRA含量为21.06％，回收率为81.9％.

实施例二.

称取Banaba叶子300g，用6倍量60％正丙醇3L，回流提取3次，每次用正丙醇3L，各提取80分钟，合并提取液，将提取液用0.2μ膜真空过滤。取清洗干净的ADS-5树脂300g装柱，将提取液通过该树脂，流速为3BV/h。首先用1L60％的正丙醇冲洗树脂；然后用1.5L的80％正丙醇以2BV/h的流速洗脱CRA，收集该流分。将洗脱液在70□下真空浓缩至500ml，然后将浓缩液冷冻干燥。得到的CRA粉末称重为2.72g，经HPLC外标法检测，CRA含量为29.58％，回收率为53.7％.

实施例三.

称取Banaba叶子200g，用6倍量70％异丙醇4L，回流提取3次，每次用异丙醇4L，各提取80分钟，合并提取液，将提取液用离心机8000转/分处理。取清洗干净的HP20树脂100g装柱，将离心所得提取液通过该树脂，流速为3BV/h。首先用600ml 70％异丙醇冲洗树脂；然后用800ml 90％的异丙醇以2BV/h的流速洗脱CRA，收集该流分。将洗脱液在70□下真空浓缩至300ml，然后将浓缩液冷冻干燥。得到CRA粉末，称重为0.654g，经HPLC外标法检测，CRA含量为51.38％，回收率33.6％。