[发明专利]肾上腺髓质素(27－52)的固相合成方法

权利要求书

1.肾上腺髓质素(27-52)的固相合成方法，其特征在于首先将保护氨基酸Fmoc-Ala-OH按照Fmoc多肽固相合成的方法接到树脂上，然后继续将余下的保护氨基酸依次逐个连接，再后用切肽试剂将合成的粗肽切下，最后将粗肽分离提纯即得目标肽肾上腺髓质素(27-52)。

2.按照权利要求1所述的肾上腺髓质素(27-52)的固相合成方法，其特征在于：

将保护氨基酸Fmoc-Ala-OH按照Fmoc多肽固相合成的方法接到树脂上是先将树脂用溶剂在室温下溶胀0.5～2h抽滤，然后将保护氨基酸Fmoc-Ala-OH、碳二亚氨类缩合剂、缩合剂4-二甲氨基哌啶，按树脂的摩尔倍数计为1.0～4.4∶1.0～4.4∶0.1～1.0的配比溶于以树脂重量计为5～40mL/g溶剂中，并将其与树脂一起在室温下搅拌反应0.5～12h，用洗涤液洗涤，再后用脱保护液脱除Fmoc保护基后再次洗涤，最后抽干到恒重或直接将购得的Fmoc-Ala-树脂先用溶剂在室温下溶胀0.5～2h抽滤，再用脱保护液脱除Fmoc保护基后洗涤，最后抽干到恒重；

继续将余下的保护氨基酸依次逐个连接是按ADM(27-52)的序列由C端向N端延伸，且每个保护氨基酸的连接步骤是首先将抗消旋缩合剂、脲鎓或磷鎓类缩合剂、缩合剂二异丙基乙胺和相应的保护氨基酸残基，按树脂的摩尔倍数计为1.0～4.4∶1.0～4.4∶1.0～4.4∶1.0～3.0的配比加入到脱除了Fmoc保护基的-Ala-树脂中，并加入以树脂重量计为5～40mL/g溶剂，在室温下缩合0.5～6h，然后用洗涤剂洗涤，再后用脱保护液脱除Fmoc保护基并用洗涤剂洗涤，随后重复进行缩合-洗涤-脱保护-洗涤过程直到第26个氨基酸连接完毕；

用切肽试剂将合成的粗肽切下是先将用三氟乙酸-苯甲硫醚-二巯基乙醇-苯甲醇按体积比为80～97∶1～10∶1～5∶1～5配制的切肽试剂，以树脂重量计为8～60ml/g加入，并在冰水浴下搅拌反应1～12h后过滤，然后用三氟乙酸按树脂重量计用2～8ml/g洗树脂2～5次，洗液并入滤液中进行蒸发浓缩，再加入沉淀剂沉淀，分离，残留物冷冻干燥得粗肽。

3.按照权利要求2所述的肾上腺髓质素(27-52)的固相合成方法，其特征在于所用保护氨基酸的摩尔倍数为1.5～2.5。

4.按照权利要求2或3所述的肾上腺髓质素(27-52)的固相合成方法，其特征在于所用树脂为对羟甲基苯氧甲基聚苯乙烯树脂或对-烷氧基苯甲醇树脂；所用溶剂为二氯甲烷或N-甲基吡咯烷酮；所用碳二亚氨类缩合剂为二环已基碳二亚胺或二异丙基碳二亚胺；所用洗涤液为N-甲基吡咯烷酮、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、甲醇中的至少一种；所用脱保护液为体积比20％或50％的吡啶与二甲基甲酰胺混合液。

5.按照权利要求2或3所述的肾上腺髓质素(27-52)的固相合成方法，其特征在于所用抗消旋缩合剂为1-羟基苯并三氮唑；所用脲鎓或磷鎓类缩合剂为1-羟基-苯并-三氮唑四甲基六氟磷酸盐或1-氧-3-双二甲胺羰基苯骈三氮唑四氟化硼盐。

6.按照权利要求4所述的肾上腺髓质素(27-52)的固相合成方法，其特征在于所用抗消旋缩合剂为1-羟基苯并三氮唑；所用脲鎓或磷鎓类缩合剂为1-羟基-苯并-三氮唑四甲基六氟磷酸盐或1-氧-3-双二甲胺羰基苯骈三氮唑四氟化硼盐。

7.按照权利要求2或3所述的肾上腺髓质素(27-52)的固相合成方法，其特征在于所用沉淀剂为冰乙醚。

8.按照权利要求6所述的肾上腺髓质素(27-52)的固相合成方法，其特征在于所用沉淀剂为冰乙醚。