[发明专利]一种改进的用于对白细胞进行分类的试剂及方法

说明书

技术领域

本发明涉及细胞分类所用的试剂及分类方法，特别是涉及一种对血液中的白细胞进行分类时所用的试剂及分类方法。

背景技术

在临床检查领域中，用患者的全血对白细胞进行分类计数工作，在诊断各种疾病时是极其常见并且非常重要的。

迄今为止，用于白细胞分类的装置及方法的专利发表了许多。其中，中国专利CN95115317.X公开了一种通过两种试剂完成白细胞的五分类的方法。该两种试剂除都含有非离子表面活性剂和缓冲剂外，第一试剂至少含一种离子表面活性剂和一种带阴离子的有机化合物，将血细胞分成淋巴细胞、单核细胞、嗜酸细胞以及嗜碱细胞加中性粒细胞四类，第二试剂至少含一种离子表面活性剂，将血细胞分成嗜碱细胞和其他细胞类群。该方法通过综合两种结果将白细胞五分类。检测系统为激光散射法。

另外，美国专利5,677,183、5,618,733、5,731,206，以及申请号为88101677、审定号为CN1018586B的中国专利，均公开了利用光散射法结合两个通道对白细胞进行5分类的方法。

但是，在利用这些现有方法对白细胞进行分类的过程中，单核细胞常常介于淋巴细胞与中性粒细胞之间，聚类性不明显，与淋巴细胞及中性粒细胞的分界不明显，导致分类结果与实际结果出现偏差。

发明内容

本发明的目的就是为了针对现有技术中的问题，提供一种能在一个通道内快速溶解红细胞并对白细胞进行分类，并且提高单核细胞的聚类性，增强单核细胞分类效果，使分类结果更为准确的试剂及方法。

为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

本发明公开了一种改进的用于对白细胞进行分类的试剂，所述试剂包括：

a、可以溶解红细胞，且使白细胞的细胞膜部分损失的表面活性剂，所述表面活性剂选自阳离子表面活性剂、两性表面活性剂以及它们的组合；

b、含有苯环或杂环的有机化合物，并且当所述表面活性剂为阳离子表面活性剂时，所述有机化合物为带有阴离子基团的有机化合物，当所述表面活性剂为两性表面活性剂或者两性表面活性剂与阳离子表面活性剂的组合时，所述有机化合物为带阴离子基团或带阳离子基团的有机化合物；

c、调节pH值的缓冲剂。

所述试剂进一步包括醇类，其在本发明的试剂中一方面发挥助溶剂的作用，另一方面对反应的过程起到促进与加速作用。

所述试剂进一步包括酸性有机物或色素。

优选的，所述缓冲剂是能够将pH值调整在2～6范围内的缓冲剂。

所述阳离子表面活性剂优选具有式I所示结构的季铵盐型阳离子表面活性剂，

其中R₁为C原子数6-14的烷基或链烯基，优选辛基、癸基或月桂基；R₂及R₃为C原子数1-4的烷基或链烯基，优选甲基、乙基或丙基；R₄为C原子数为1-4的烷基或链烯基或苄基；X为卤素原子。

所述两性表面活性剂优选具有式II所示结构的两性表面活性剂，

其中，R₅为C原子数6-14的烷基或链烯基，优选辛基、癸基或月桂基；R₆及R₇为原子数1-4的烷基或链烯基，优选甲基、乙基或丙基。

本发明还公开了一种采用上述的试剂对白细胞进行分类的方法，所述方法包括步骤，将所述的试剂加入到全血样本中，使白细胞分成与淋巴细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞分别对应的3个集团以及与中性粒细胞和嗜碱粒细胞相对应的1个集团共计4个集团，然后通过测定细胞大小和形态信息对所分成的四个集团进行分类计数。

所述测定细胞大小信息利用激光散射法采用低角度散射光完成，测定角度为2-6度；所述测定细胞形态信息利用激光散射法采用高角度散射光完成，测定角度为8-20度。

由于采用了以上的方案，使本发明具备的有益效果在于：

利用本发明的试剂及方法进行白细胞分类时，不仅能够将白细胞分成与淋巴细胞、单核细胞、嗜酸细胞分别对应的3个集团，以及与中性粒细胞和嗜碱细胞相对应的1个集团共计4个集团，并且，所分出单核细胞集团聚类性明显，与淋巴细胞、中性粒细胞的分界清晰；试剂处理后的血样经散射光检测后，对不同比例的单核细胞均能形成独立的散点区，且位置固定，不受细胞核左(右)移的影响，使分类结果更符合实际情况。

附图说明

图1是利用本发明实施例1的试剂对A血样进行白细胞四分类计数时的低角度散射光及高角度散射光的散射图。