[发明专利]一种烟草生物增质剂及其制备方法和应用

权利要求书

1、一种烟草生物增质剂，其特征在于：包括以下重量份数的成份：巨大芽孢杆菌ZXB₁(Bacillus megaterium)，中国普通微生物菌种保藏管理中心CGMCC，保藏编号1.941，180-200份；枯草芽孢杆菌ZXB₂(Bacillus subtilissubsp.subtilis)，中国普通微生物菌种保藏管理中心CGMCC，保藏编号1.354，180-200份；糖化酶5-15份；淀粉酶50-200份；蛋白酶450-550份。

2、根据权利要求1所述的烟草生物增质剂，其特征在于：所述的糖化酶为黑曲霉糖化酶。

3、根据权利要求1所述的烟草生物增质剂，其特征在于：所述的的淀粉酶为细菌α-淀粉酶。

4、根据权利要求1所述的烟草生物增质剂，其特征在于：所述的蛋白酶可以为枯草芽孢杆菌中性蛋白酶。

5、一种如权利要求1所述的烟草生物增质剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)菌剂的制备；

(2)烟草生物增质剂的配制：

取重量份数为180-200份的巨大芽孢杆菌ZXB₁(Bacillus megaterium)，中国普通微生物菌种保藏管理中心CGMCC，保藏编号1.941，经固体培养制备的菌粉；180-200份的枯草芽孢杆菌ZXB₂(Bacillus subtilis subsp.subtilis)，中国普通微生物菌种保藏管理中心CGMCC，保藏编号1.354，经固体培养制备的菌粉；5-15份的糖化酶、淀粉酶50-200份及450-550份的蛋白酶混合。

6、根据权利要求5所述的烟草生物增质剂的制备方法，其特征在于：所述的菌剂的制备包括以下步骤：

①菌种：ZXB₁，巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)，中国普通微生物菌种保藏管理中心CGMCC，保藏编号1.941；ZXB₂，枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis subsp.subtilis)，中国普通微生物菌种保藏管理中心CGMCC，保藏编号1.354；

②斜面培养：在新鲜斜面上接种一环菌苔，与30℃条件下培养2天；

③菌种瓶扩大培养：培养基配方是，麸皮70％，豆饼粉28.5％，尿素1.5％，料∶水＝1∶1.0，pH为9.0，按配方将原料称好拌匀后，加适量水(料∶水＝1∶1.0).继续翻拌，达到手握成团，触之即散的程度，再用2％NaOH溶液调整pH值为9.0，分别于菌种瓶中，装量至瓶肩稍靠下一点，擦去瓶口及瓶身粘附的培养料，然后塞上棉塞，上边盖两层纸板用线绳扎好，在1.1-1.5kg/cm²压力下灭菌1.5h；

待培养料冷却后接种，在培养好的斜面菌种中倒入7ml无菌水，制成菌悬液。将制好的菌悬液分别倒入3只菌种瓶培养基中，摇匀，置于28℃条件下培养3天，可见瓶壁上有菌苔，取下棉塞有刺鼻的微臭味，观察无其它杂菌污染即为合格；

④浅盘培养：将配制好的料分装于塑料袋中，每袋约1000g，用线绳扎口，注意不要扎得太紧，否则不利蒸汽流通灭菌，料装好后立即送入高压灭菌锅中，在1.4-1.5kg/cm²压力下灭菌1.5h，待料温降至40℃时按2％接种量接入菌种瓶中培养好的菌种，充分拌匀，然后均匀摊平，厚度2-3cm，上盖一层白布，以利保湿，培养室温度控制在28℃-30℃，当料温高于35℃时，要及时翻动培养料，并调整浅盘的上下位置。待培养3天后，料温逐渐下降，镜检绝大部分菌体已形成芽孢，即可终止培养；

⑤干燥，粉碎：将培养好的固体菌剂放入干燥箱中，在50℃条件下进行烘干，烘至含水量小于8％，然后用粉碎机进行粉碎，粉碎细度要求通过80目筛的菌粉达到95％以上；

⑥质量检验：合格菌粉的质量要求为总菌数应大于80亿个/g，水分小于8％，95％的菌粉须通过80目筛，大肠杆菌数必须小于30个/100g，沙门氏菌和绿浓杆菌不得检出。

7、一种如权利要求1所述的烟草生物增质剂的应用，其特征在于：先将1000g制剂用5000ml清水浸泡30min，边浸泡边搅拌，使菌和酶充分溶出；之后用两层纱布过滤，除去残渣，滤液用于喷雾处理发酵烟叶。在制丝生产线上使用时，选取润叶工序，利用压缩空气将滤液喷洒到润叶筒内的叶片上，之后贮叶4h，以下工序同于正常制丝工艺。