[发明专利]调节排卵

说明书

发明领域

本发明涉及鉴定GDF-9和GDF-9B分子上具有功能显著性的新结构域，并涉及与其相互作用以调节这些分子的生物活性来改变哺乳动物卵巢功能和排卵率的激动剂和拮抗剂。

发明背景

GDF-9和GDF-9B(也称为BMP15)在发育卵泡的卵母细胞中表达并对哺乳动物繁殖力起着作用(Fitzpatrick等，1998)。GDF9是转化生长因子β(TGFβ)超家族的成员(McPherron和Lee，1993)，其在来自卵泡发育初级阶段的卵母细胞中表达，直到排卵(McGrath等，1995；Laitinen等，1998)。GDF9B与GDF9密切相关(Dube等，1998；Laitinen等，1998)，并在小鼠卵母细胞中与GDF9同时期表达，但在人初级卵泡中稍晚于GDF9表达。在卵巢中，GDF9和GDF9B现在已经显示出能在人(Aaltonen等，1999)、啮齿动物(Laitinen等，1998；Dube等，1998；Jaatinen等，1999)、反刍动物(Bodensteiner等，1999；Bodensteiner等，2000；Galloway等，2000)和有袋类动物(Eckery等，2002)的发育卵母细胞中表达。在绵羊中，在原始卵泡中可见到GDF9的表达，而GDF9B在初级卵泡中表达(Bodensteiner等，1999；Galloway等，2000)。

GDF9和GDF9B，像TGFβ家族的大多数其它成员一样，由包含信号肽、原区域和作为生物活性肽的C-末端成熟区域的前原肽编码。通过细胞内弗林蛋白酶样蛋白酶将成熟区域从原区域上裂解下来，裂解发生在保守的弗林蛋白酶裂解位点上。TGFβ超家族的大多数成员在二聚体时有生物活性，虽然GDF9和GDF9B不包含该家族几乎所有成员中都能见到的进行共价链内二硫键连接的半胱氨酸分子，但是这些分子被认为在二聚体时有生物活性(Galloway等，2000；Yan等，2001)。可是不清楚有生理活性的二聚体是同二聚体(GDF9-GDF9和GDF9B-GDF9B)还是异二聚体(GDF9-GDF9B)，或者所有三种二聚体形式都起作用。基于以上模型已假定GDF9同二聚体在小鼠中起更重要的作用，而在绵羊中GDF9B同二聚体最有生物活性(Yan等，2001)。不清楚是否这些差异与绵羊是单排卵动物(每个周期通常仅成熟一个卵)、而鼠是多排卵的事实有关。清楚的是，GDF9和GDF9B都在控制和保持哺乳动物的繁殖力中起着关键的作用，而且理解它们的作用性质对疗法的开发来说是必需的。

Jeffery等(2003)使用了生物信息学工具(GoCore)在许多不同TGF-β家族成员中分析保守的区域，并在不同物种中针对GDF-9和GDF-9B分析，尝试着鉴定具有功能显著性的区域。可是，该研究没有将鉴定为可能功能显著性位点的区域与体内调节排卵的效果关联起来。

本发明的目的是鉴定GDF-9和/或GDF-9B分子上具有功能显著性的结构域，并鉴定与这些结构域相互作用或模拟这些结构域以调节它们的生物活性从而体内调节哺乳动物的卵巢功能和排卵率的激动剂和拮抗剂；和/或向公众提供有用的选择。

用于本说明书和权利要求书的术语″包含″指“至少部分由...组成”，就是说当解释包括该术语的独立权利要求时，每个权利要求中在该术语之后的特征都需要出现，但其他特征也可以出现。

发明简述

本发明基于对GDF-9和GDF-9B分子上具有功能显著性的新结构域的鉴定，并涉及与其相互作用的激动剂和拮抗剂。

更具体地，本发明基于对成熟GDF-9和GDF-9B分子N-末端附近具有功能显著性的结构域的鉴定和表征，其中GDF-9的N-末端结构域包含氨基酸序列：

DQESASSELKKPLVPASVNLSEYFKQFLFPQNEC(SEQ ID NO：1)；而且

GDF-9B的N-末端结构域包含氨基酸序列：

QAGSIASEVPGPSREHDGPESNQC(SEQ ID NO：2)。

因此，本发明涉及GDF-9N-末端结构域的分离片段，其具有调节雌性哺乳动物排卵的能力，其中所述GDF-9N-末端结构域由氨基酸序列DQESASSELKKPLVPASVNLSEYFKQFLFPQNEC(SEQ ID NO：1)组成，或其功能衍生物、同源物、类似物或模拟物。

肽片段优选包含来自SEQ ID NO：1第1-9或25-34位的至少一个氨基酸。