[发明专利]抗体和用于产生对生物活性完整甲状旁腺激素（PTH）1－84具有选择性结合特异性的抗体的肽抗原

说明书

相关申请的交叉参考

本申请是2000年12月5日提交的美国专利申请顺序号09/730,174的部分继续申请，该申请的发明名称为抗体和用于产生对生物活性完整甲状旁腺激素(PTH)1-84具有选择性结合特异性的抗体的肽抗原，且现在处于颁布过程中，在此将其教导专门引入作为参考。

声明：联邦政府资助的研究/开发

不适用

发明背景

甲状旁腺激素(PTH)及其在调节血液中钙离子浓度中的重要性是公知的。在这点上，通过甲状旁腺产生该激素，并与其他因子联合起作用来调节血钙离子水平，使得将细胞和周围液体中的血钙离子水平维持在稳定的浓度。实质上，当血清钙水平降低时，PTH起作用来释放体内贮存的钙。另一方面，可将这样的分泌抑制到血清钙浓度增加的程度。

在其完整形式中，PTH包括由84个氨基酸构成的单一肽。PTH的特定序列，如多个物种即，人、大鼠、小鼠、牛、狗、猪、猫和猴所具有的，描绘于图1中，图2中描绘了其变化形式，这说明了在这些鉴定的物种之间该激素保持着相对一致的结构。

已知其在钙代谢中的重要性不仅是对于人而且是对于多种物种，因此精确测量PTH具有并持续具有实质性的临床重要性。如许多文献所证明的，血清PTH水平作为患病患者的重要参数，特别是如血钙过多、原发性甲状旁腺功能亢进症和骨质疏松症患者。PTH同样在遭受慢性肾衰竭的患者中具有实质性的临床重要性，由于PTH异常，该慢性肾衰竭患者可以发展成肾性骨营养不良。

尽管它在代谢中的重要作用和临床重要性，但对于测定循环生物活性PTH水平具有并持续存在着实质性的困难。首先，公知的是通常PTH以非常低的水平存在，通常为10pg/ml至65pg/ml。此外，已知PTH肽可以以多种循环PTH片段存在，特别是大的非-(1-84)循环PTH片段中，该片段似乎与(7-84)PTH分子在色谱上共同迁移并已知显著干扰常规的PTH测定测量值。实际上，大的非(1-84)PTH片段可以代表约一半(1/2)通过大部分当前的测定法测量的PTH。公开的专利合作条约国际中请PCT/US00/00855，国际公开号为WO/00/42437，发明名称为辨别和监控甲状旁腺和骨状态相关疾病的方法，和Lepage，Raymond等，非-(1-84)循环甲状旁腺激素(PTH)片段干扰尿毒症样品中完整PTH商业测定法测量，Clinical Chemistry 44：4，1998，p805-809中给出了PTH精确测量的公认缺陷的实例，在此将其教导专门引入作为参考。

在克服该缺陷的尝试中，Scantibodies实验室，Santee，California，介绍了检测PTH水平的新测定法，其引入了对人PTH最末端N-末端部分具有结合特异性的示踪抗体，更具体地是其头六个氨基酸残基。按照目前所理解的，这样的测定法似乎使与大的非-(1-84)PTH片段的交叉反应性减到最小。然而，为了得到这样的抗体需要在其纯化中付出大量的努力和费用。此外，这样的示踪抗体只对PTH的头一个氨基酸残基具有最大识别，基本上降低了对任何随后残基的特异性，因此不能将其用于其中头一个氨基酸不同的一些其他物种。这样的缺陷描述于M.R.等的论文中，题目为新的免疫放射性测定法检测全长人PTH，而不是氨基末端截断的片段：肾衰竭中PTH测量的推断，The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism，Vol.84，No.11，1999，p.4287-4290，在此将其教导专门引入作为参考。

因此，本领域中已经并持续长期迫切需要对生物活性完整PTH具有特异性的测定结合配偶体及其制备方法，该测定结合配偶体可以确定具有与PTH肽片段降低的交叉反应性的PTH水平。本领域中同样需要改良的PTH结合配偶体，该配偶体可以以有更高的成本效益的方式测量PTH水平并对PTH具有更大的亲和性，可以将其容易地掺入免疫测定试剂盒等中。再进一步，本领域中存在对结合配偶体的需要，即，具有对PTH特异的结合识别并可以用来检测多种物种中PTH水平的抗体。最后，本领域中存在对改良的结合配偶体的需要，该配偶体对PTH具有高的结合亲和性，并可以应用常规机理容易地得到，需要最小限度的纯化，导致对完整的PTH更大的结合识别，与大的非-(1-84)PTH片段具有最小限度的交叉反应性，并可以利用产生比现有技术结合配偶体更高抗体产量的方法得到。

发明简述