[发明专利]促进细胞和/或组织培养物中指定产物生长和合成的肽组分

说明书

技术领域

本发明涉及补充细胞或组织培养基的领域。更特别地，本发明涉及一种无血清和/或无蛋白的细胞培养基，该培养基含有分离自油菜籽的肽组分(peptide fraction)，特别是分离自油菜籽饼的肽组分。本发明还涉及一种制备含有这些肽组分的细胞培养基的方法及其用途。

背景技术

因为活体细胞的存在已为大众所知，细胞培养基的类型和技术在不断进步和多样化。

最初，细胞培养基使用未作定义的培养介质例如血浆、血清或胚胎提取物。直到20世纪50年代中期，最初被定义的培养介质才出现，除了盐和葡萄糖外，所述的培养基中包含了细胞自身不能合成的各种氨基酸和维生素。

近来已经发现，在所有的氨基酸当中，L-谷氨酸起到一个重要作用，它既作为能量来源也可以作为碳源和氮源，并且主要用于嘌呤和嘧啶的合成。然而，存在的缺陷是谷氨酸不能以稳定的游离氨基酸形式存在并且容易分解为铵离子和焦谷氨酸。解决这个问题的方法(基于应用谷类水解反应)已在名称为QUEST INTERNATIONAL的发明专利申请WO96/26266中公开。

通常，细胞和组织，特别是动物细胞，在体外在营养培养基培养，所述培养基是碱基或基础培养基，其中补充了5-20％的血清，通常是小牛胎盘血清或FCS。

然而，这些血清的使用有其它缺陷，例如i)引入的动物蛋白必须随后除去，ii)可能引入潜在的污染物例如霉菌，细菌，病毒或朊病毒(prions)，iii)质量不稳定而且成本高。

此外，尤其是为了控制医用产品中的牛绵状脑病(BSE)的威胁，所有国家的法律和国际法律都期望在不久的将来禁止使用来源于动物的产品。

在这些缺陷中，引入污染物的威胁是最大的问题并且促使人们使用无血清的培养基或SFM。然而，当前使用的某些SFM仍然含有胨和来源于动物的水解物，因此并不能完全令人满意的解决上述提及的污染风险问题。

至于不含动物来源的材料的SFM，它们通常来源于富含蛋白质的原材料，例如谷类原料，如大米(WO98/15614；WO99/57246)或小麦。其它可用原料的例子，如大豆(WO01/23527；WO00/03000)，或者黄瓜(WO99/47648)。然而，获得这些培养基的成本通常相对较高，并且通常来源于含有高含量的蛋白质的原料，这些原料也可用于其它应用中，例如食品用途。因此实际上真正需要开发一种彻底无动物来源产品的培养基，并且不贵或者，至少它来源于其价值是被和/或轻微开发的原料。

发明内容

本发明意欲通过制备一种无血清的、来源于起始蛋白质含量低的植物原料的培养基来克服现有技术的缺陷。

更特别地，本发明涉及使用肽提取物制备和/或补充无血清的体外细胞或组织的培养基，所述提取物通过连续分离植物原料获得，特征在于所述的植物原料由油菜籽组成。

术语“无血清培养基”应该理解为不含动物来源血清例如FCS，FBS(小牛胚胎血清)或其它类似血清的培养基。

如今，源自细胞培养物的大部分产品是单克隆抗体，病毒和重组蛋白。从工业角度看，目前大规模培养的细胞，包括来自组织的细胞或在毒理学中作为动物模型的替代品在内的细胞，都是融合细胞，VERO细胞(非洲绿猴肾细胞)，BHK细胞(幼仓鼠肾细胞)，CHO细胞(中国仓鼠卵巢)，NS0细胞，或被杆状病毒感染的草地贪夜蛾(Sf9)细胞。融合细胞是生产单克隆抗体的细胞，而VERO和CHO细胞通常用于制备病毒或其它重组蛋白。当然，上述所列举的细胞并不限制本发明，本发明可以涉及任意类型的细胞。

通过不受限制的例子，要提到下述组织：软骨，肌肉细胞，皮肤，骨细胞，腱，胚胎细胞，人造器官。

本发明的第一个特征是基于产油植物，特别是油菜籽的使用。实际上，与谷类或其它当前利用的原料不同，这种菜籽尤其富含油脂并且蛋白质含量低。因为这些原因，时到今日，本领域技术人员都没有尝试使用油菜籽制备培养基，因为目前普遍认为用作培养基的原料必须优先含有大量的蛋白质。

完全令人惊讶的是，与现有技术的偏见相反，本发明证明了可以使用油菜籽制备无血清和/或无蛋白质的培养基。甚至更令人惊讶的是，本发明也证明了含有源自油菜籽的肽提取物的培养基不仅可以明显提高放置在培养基中的细胞或组织的最终浓度，也可以提高一种或多种通过培养基中的细胞产生的所需目标分子的生成率。

此外，本发明还证明了最终细胞或组织浓度的提高与不仅与营养作用相关。