[发明专利]用于治疗、诊断和色谱层析的泛蛋白或γ晶体缀合物

权利要求书

1.制备缀合物的方法，所述缀合物包括下述成分：

一种或多种基于人泛蛋白的多肽分子(I)，每种分子具有新产生的与配 体特异性结合的结合特性，和共价地与其连接的

一种或多种功能成分(II)，其选自由下列各项组成的组：多肽、肽、 蛋白、有机聚合物、脂质、糖、低分子量物质、以及这些物质的衍生物，

其中在(I)与(II)偶联后，所有成分的功能性得到保留，

并且其中所述方法包括下述步骤：

a)选择要被修饰的多肽分子，其中所述多肽分子是人泛蛋白；

b)确定配体，其中所述配体选自多肽、肽或蛋白；

c)选择人泛蛋白的氨基酸2，4，6，62，63，64，65和66；

d)通过取代修饰所选氨基酸，同时保留泛蛋白样折叠基序；

e)将所修饰的人泛蛋白与在步骤b)中确定的配体相接触；

f)检测适于与步骤b)中预先确定的配体的特异性结合的那些修饰的 人泛蛋白，与相应的野生型泛蛋白相比，其对于形成的复合物解离常数 K_D＝10^-6M-10^-12M；

g)在意欲与配体特异性结合的多肽分子(I)的β折叠的表面-暴露区之 外的区域偶联成分(I)和(II)，所述偶联通过与(I)融合的其它末端肽中的氨 基酸残基进行，所述其它末端肽含有一个或多个半胱氨酸残基或者一个或 多个赖氨酸残基，或其中(I)与(II)的偶联通过(I)的半胱氨酸或赖氨酸进行；

h)分离缀合物；和

i)确定成分(I)和(II)的功能性。

2.按照权利要求1的制备缀合物的方法，其中成分(I)和(II)的偶联通过泛 蛋白分子的赖氨酸残基11、29、33或48进行。

3.按照权利要求2的制备缀合物的方法，其中与(I)融合的其它末端肽含 有一个或多个半胱氨酸残基或者一个或多个赖氨酸残基，其中这些氨基 酸残基不参与(I)与配体的相互作用。

4.按照权利要求1的制备缀合物的方法，其中所述功能成分(II)是蛋白生 色团、酶、免疫球蛋白、免疫球蛋白衍生物、毒素或按照I的多肽。

5.按照权利要求1的制备缀合物的方法，其中所述功能成分(II)是聚合 物，所述聚合物选自葡聚糖、聚甲基丙烯酸酯、琼脂糖凝胶、琼脂糖、聚 乙烯、聚苯乙烯、硅胶、纤维素或聚乙二醇、或聚合物衍生物。

6.按照权利要求1的制备缀合物的方法，其中所述功能成分(II)是低分子 量物质，所述低分子量物质选自染料、生物素、洋地黄毒苷、重金属、螯 合剂、放射性同位素、抗生素或细胞毒性物质。

7.按照权利要求1的制备缀合物的方法，其中所述成分(I)表现出新产生 的关于与配体特异性结合的结合特性，所述配体是多肽或蛋白，所述多 肽或蛋白选自免疫球蛋白及免疫球蛋白衍生物，获得于血浆的蛋白，血 液凝固因子和抑制剂，生长因子，白介素，细胞因子，受体蛋白，糖蛋 白，病毒蛋白和细胞表面标记。

8.按照权利要求7的制备缀合物的方法，其中所述细胞表面标记是 CD14、CD25、CD34。

9.按照权利要求1的制备缀合物的方法，其中所述成分(I)表现出新产生 的关于与配体特异性结合的结合特性，所述配体是肽，所述肽选自亲和 标记或病毒源性的肽。

10.按照权利要求9的制备缀合物的方法，其中所述亲和标记是S-标记， T7-标记，His-标记，Strep-标记，Myc-标记或FLAG-标记。

11.按照权利要求1的制备缀合物的方法，其中所述成分(II)是一种或多 种基于泛蛋白的多肽，其与(I)相同并且共价与(I)连接，从而由于亲和作 用实现针对(I)的配体的亲和性的增加。

12.按照权利要求1的制备缀合物的方法，其中所述成分(II)是多肽、蛋 白或聚合物，成分(I)与其共价连接几次，从而由于亲和作用实现针对(I) 的配体的亲和性的增加。