[发明专利]鼠李糖启动子表达系统

权利要求书

1.一种可在原核宿主中表达的用于表达抗体的载体，它包含操作性连接于转录单元的 L-鼠李糖操纵子的rhaBAD启动子，且所述rhaBAD启动子由SEQ ID NO：1构成，该转录单 元含有

a)对于所述宿主来说是异源的编码抗体的核酸序列，

b)操作性连接于所述核酸序列的原核生物信号序列，该原核生物信号序列选自糖、氨基 酸、维生素和离子的周质结合蛋白的信号肽，所述核酸序列的表达由所述启动子区域控制， 和

c)翻译起始区域，所述翻译起始区域位于所述转录单元的翻译起始位点上游，该翻译起始 区域由序列AGGAGATATACAT(SEQ ID NO：2)构成，其中所述翻译起始区域与所述核酸序 列操作性连接。

2.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述信号肽选自来自下组物质的信号肽： LamB、MalE、Bla、OppA、TreA、MppA、BglX、ArgT、MalS、HisJ、XylF、FecB、OmpA 和PhoA。

3.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述转录单元还含有转录终止区域，该转录 终止区域是rrnB转录终止序列。

4.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述核酸序列编码Fab片段。

5.如权利要求4所述的载体，其特征在于，所述Fab片段的重链和轻链由双顺反子转 录单元编码。

6.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述rhaBAD启动子和所述操作性连接的 转录单元由SEQ ID NO：3构成。

7.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述rhaBAD启动子和所述操作性连接的 转录单元由SEQ ID NO：4构成。

8.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述载体是自主复制或自复制的质粒、粘 粒、噬菌体或病毒。

9.如权利要求8所述的载体，其特征在于，所述病毒是逆转录病毒。

10.权利要求1所述的载体在核酸序列的受调节异源表达中的用途，其中所述核酸序列 是原核生物宿主中编码抗体的核酸序列。

11.如权利要求10所述的载体的用途，其特征在于，所述抗体是Fab片段，该Fab片 段的重链和轻链以相等的量表达。

12.一种可用于在原核宿主中表达抗体的分离纯化的核酸序列，它含有操作性连接于转 录单元的L-鼠李糖操纵子的rhaBAD启动子，其中所述rhaBAD启动子由SEQ ID NO：1构 成，该转录单元含有

a)对于所述宿主来说是异源的编码抗体的核酸序列，

b)操作性连接于所述核酸序列的原核生物信号序列，该原核生物信号序列选自糖、氨基 酸、维生素和离子的周质结合蛋白的信号肽，所述核酸序列的表达由所述启动子区域控制， 和

c)所述转录单元在其翻译起始位点上游还含有翻译起始区域，该翻译起始区域由序列 AGGAGATATACAT(SEQ ID NO：2)构成，其中所述翻译起始区域与所述核酸序列操作性连 接。

13.如权利要求12所述的分离纯化的核酸序列，其特征在于，所述rhaBAD启动子和 所述操作性连接的转录单元由SEQ ID NO：3构成。

14.如权利要求12所述的分离纯化的核酸序列，其特征在于，所述rhaBAD启动子和 所述操作性连接的转录单元由SEQ ID NO：4构成。

15.转化了权利要求1所述的载体的原核生物宿主。

16.转化了权利要求12所述的分离纯化的核酸序列的原核生物宿主。

17.一种在宿主中生产抗体的方法，该方法包括步骤：

a)构建权利要求1所述的载体；

b)用所述载体转化原核生物宿主；

c)在适当条件下，使所述抗体在细胞培养系统中表达；

d)从该细胞培养系统中回收所述抗体。