[发明专利]Wnt蛋白及癌症的检测与治疗

说明书

联邦赞助的研究的声明

本发明由政府资助，国立健康研究院赞助金编号CA035711和 AA002666。政府享有本发明的部分权利。

与相关申请的交叉参考

本申请是2005年1月5日提交的国际申请PCT/US05/000267的部 分继续申请，其要求2004年9月21日提交的美国临时申请 No.60/612,098的利益，这两个申请都在此全文引入作为参考。

技术领域

本发明涉及肝癌的检测与治疗。

背景技术

肝细胞癌(HCC)是肝脏主要的原发性恶性肿瘤。虽然已经鉴定 了病毒病原学因素，但是肝癌形成期间导致肿瘤发展的分子机制在很 大程度上仍然未知。蛋白的Frizzled家族由10个或更多个七跨膜蛋白 组成，这些蛋白起Wnt蛋白受体的作用。Wnt/Frizzled信号传导网络影 响多种生物学过程，其范围从细胞命运决定到细胞迁移和增殖。

β-联蛋白是在细胞-细胞粘着中发挥作用的多因子蛋白，其参 与增强钙粘着蛋白及α-联蛋白与肌动蛋白细胞骨架的连接。当缺乏 Wnt/Frizzled信号传导时，β-联蛋白通过与糖原合酶激酶(GSK)- 3β的相互作用被磷酸化，并形成与轴蛋白和腺瘤性结肠息肉蛋白 (adenomatous polyposis coli protein，APC)的复合物。随后，β-联蛋 白被靶向来由泛蛋白蛋白酶体系统降解。相反，Wnt配体与其Frizzled 受体的结合通过抑制GSK-3β酶促活性稳定细胞内的β-联蛋白。然 后，β-联蛋白易位到细胞核中，与高速泳动族(high mobility group) 结构域因子，如Tcf/Lef联合。该复合物与生长调节及细胞迁移相关基 因的转录上调有关。

发明概述

本发明部分基于下述发现，即Wnt3、8b和11是Frizzled 7的配体， 其通常在HCC中，例如在乙肝病毒(HBV)相关的HCC中在mRNA 和蛋白水平过度表达。过度表达Frizzled 7的肝癌细胞显示出细胞移动 性和迁移增强。过度表达似乎为肝细胞转化的多步过程中的早期事件， 因此，Frizzled 7及Wnt 3、8b和11是肝癌治疗中新的分子靶标。

因此，在一方面，本发明提供了鉴定抗癌剂的方法。该方法包括 择选与包含Wnt 3、Wnt 8b或Wnt 11蛋白的氨基酸序列或其FZD结合 片段的多肽结合的测试化合物，和任选的测定测试化合物是否能够(i) 降低细胞中Wnt/FZD 7信号传导，(ii)降低肝癌细胞移动性，(iii)降 低肝癌细胞中β-联蛋白的积聚；或(iv)在体外或体内治疗肝癌；其 中能够达到(i)到(iv)中至少一项的测试化合物是抗癌剂。在一些 实施例中，选择测试化合物可以包括提供包含Wnt 3、Wnt 8b或Wnt 11 蛋白的氨基酸序列或其FZD结合片段的多肽，将所述多肽与测试化合 物接触，检测所述多肽与测试化合物之间的结合；和如果所述测试化 合物和多肽结合，选择所述测试化合物。与测试化合物结合的多肽可 以是(i)天然存在的多肽，(ii)重组多肽，(iii)在细胞表面表达的多 肽，或(iv)分离的多肽。当多肽包含Wnt 3蛋白的氨基酸序列时，所 述多肽可以包含SEQ ID NO：8到12中的任一序列。当所述多肽包含 Wnt 8b蛋白的氨基酸序列时，所述多肽可以包括SEQ ID NO：15到19 中任一序列。当多肽包含Wnt 11蛋白的氨基酸序列时，所述多肽可以 包含SEQ ID NO：22到26中任一序列。在某些实施例中，所述多肽包 含SEQ ID：7到27中任一序列以及至少一个非Wnt序列。测试化合物 可以选自下组：多肽、核糖核酸、小分子(如小有机分子)和脱氧核 糖核酸。

通过本文所述的鉴定癌症试剂的方法鉴定的抗癌剂包括，但不限 于，抗Wnt抗体，如单克隆抗体，FZD7受体，FZD7受体的Wnt结合 片段和其它结合Wnt的化合物。通过这些方法鉴定的抗癌剂可以被用 于治疗癌症，例如肝癌。此外，通过这些方法鉴定的抗癌剂可以被用 于制备用以治疗肝癌或降低患者中肝癌细胞移动性的药物。