[发明专利]包括含有嵌入性假核苷酸(IPN)的嵌入性核酸(INA)的扩增阻断剂

权利要求书

1.第一扩增阻断剂，第二扩增阻断剂，第一引物和第二引物在制备用 于在扩增试验中检测核酸分子目标区域甲基化状态的试剂盒中的应 用，其中所述第一扩增阻断剂具有15-50个核苷酸或核苷酸类似物长 度并包括含有2个-10个内部嵌入性假核苷酸(IPNs)的嵌入性核酸 (INA)，其中所述IPN选自1-(4，4’-二甲氧基三苯基甲氧基)-3-芘-甲氧 基-2-丙醇的亚磷酰胺，所述第一阻断剂与修饰的核酸模板第一链上 未甲基化的目标区域互补，

所述修饰的核酸模板是通过用修饰胞嘧啶碱基但是不修饰5-甲 基-胞嘧啶碱基的试剂处理所述核酸分子而形成，所述试剂选自亚硫 酸氢盐，醋酸盐或柠檬酸盐，

所述第二扩增阻断剂包括具有15-50个核苷酸或核苷酸类似物长 度并含有2个-10个内部嵌入性假核苷酸(IPNs)的嵌入性核酸(INA)， 其中所述IPN选自1-(4，4’-二甲氧基三苯基甲氧基)-3-芘-甲氧基-2-丙 醇的亚磷酰胺，所述第二阻断剂与所修饰的核酸模板第一链的互补第 二链下游上的区域互补，

所述第一引物与所修饰的核酸模板第一链上目标区域上游的核 酸区域互补，

所述第二引物与所修饰的核酸模板第一链的互补第二链上第二 阻断剂区域下游的核酸区域互补，

其中通过进行扩增反应，如果所述目标区域被甲基化，那么将有 扩增产物，并且如果所述目标区域未被甲基化，那么将没有扩增产物。

2.第一扩增阻断剂，第二扩增阻断剂，第一引物和第二引物在制备用 于在扩增试验中检测核酸分子目标区域甲基化状态的试剂盒中的应 用，其中所述第一扩增阻断剂包括具有15-50个核苷酸或核苷酸类似 物长度并含有2个-10个内部嵌入性假核苷酸(IPNs)的嵌入性核酸 (INA)，其中所述IPN选自1-(4，4’-二甲氧基三苯基甲氧基)-3-芘-甲氧 基-2-丙醇的亚磷酰胺，所述第一阻断剂与修饰的核酸模板第一链上 甲基化的目标区域互补，

所述修饰的核酸模板是通过用修饰胞嘧啶碱基但是不修饰5-甲 基-胞嘧啶碱基的试剂处理所述核酸分子而形成，所述试剂选自亚硫 酸氢盐，醋酸盐或柠檬酸盐，

所述第二扩增阻断剂具有15-50个核苷酸或核苷酸类似物长度并 包括含有2个-10个内部嵌入性假核苷酸(IPNs)的嵌入性核酸(INA)， 其中所述IPN选自1-(4，4’-二甲氧基三苯基甲氧基)-3-芘-甲氧基-2-丙 醇的亚磷酰胺，所述第二阻断剂与所修饰的核酸模板第一链的互补第 二链下游上的区域互补，

所述第一引物与所修饰的核酸模板第一链上目标区域上游的核 酸区域互补，

所述第二引物与所修饰的核酸模板第一链的互补第二链上第二 阻断剂区域下游的核酸区域互补，

其中通过进行扩增反应，如果所述目标区域未被甲基化，那么将 有扩增产物，并且如果所述目标区域被甲基化，那么将没有扩增产物。

3.按照权利要求1或2的应用，其中所述试剂盒还包括：

第三和第四扩增阻断剂，所述第三和第四扩增阻断剂包括具有 15-50个核苷酸或核苷酸类似物长度并含有2个-10个内部嵌入性假 核苷酸(IPNs)的嵌入性核酸(INA)，其中所述IPN选自1-(4，4’-二甲氧 基三苯基甲氧基)-3-芘-甲氧基-2-丙醇的亚磷酰胺，所述第三和第四阻 断剂与第一和第二阻断剂区域的内部区域互补，和

第三和第四引物，其与第三和第四阻断剂区域的外部区域以及第 一和第二引物区域的内部区域互补。

4.按照权利要求3的应用，其中所述试剂盒还包括：

一种或多种针对所述核酸分子上一个或多个区域的另外的扩增 阻断剂，其包括具有15-50个核苷酸或核苷酸类似物长度并含有2个 -10个内部嵌入性假核苷酸(IPNs)的嵌入性核酸(INA)其中所述IPN 选自1-(4，4’-二甲氧基三苯基甲氧基)-3-芘-甲氧基-2-丙醇的亚磷酰 胺。

5.按照权利要求4的应用，其中所述核酸分子上的区域与所修饰的 核酸模板的一个或多个区域相对应。