[发明专利]增加癌细胞程序性细胞死亡的组合物和方法

说明书

相关申请的交叉参考

本申请要求2004年11月9日提交的美国专利申请号60/626,163的优 先权利益。

发明领域

本发明涉及细胞透过性肽以及这些肽运载功能性货物(cargo)从组 织进入细胞的应用。本发明还涉及抑制NF-κB活化的因子。

关于国家权利的陈述

本发明部分由美国政府提供的资金(授予号CA99340，由国立卫生研 究所，国立癌症研究所资助)而进行的。因此，美国政府可以拥有本发明 中的某些权利。

发明背景

前列腺癌(PCA)是美国癌症相关的死亡的第二主要起因。由于在雄激 素-依赖性前列腺癌细胞中刺激程序性细胞死亡，雄激素切除术通常用作 治疗法。PCA细胞通常是雄激素-不依赖性的，并且有一些随着时间变成 雄激素-不依赖性的。在雄激素切除术治疗过程中最终剩下了雄激素-不依 赖性细胞，并且向雄激素-不依赖性状态的进展是患有前列腺癌的男性死 亡的主要起因。雄激素-不依赖性肿瘤细胞更难被消灭，已经表明其对许 多抗癌药物和肿瘤坏死因子α(TNF-α)治疗法不敏感。雄激素-不依赖性 RCA细胞与高剂量的化学治疗药物诸如顺铂和依托泊苷反应，但是这些 药物本身具有不理想的系统性毒性水平。倘若水平足够高足以影响显著数 目的肿瘤细胞，那么可能对患者构成不可接受的威胁。

已经证明雄激素-不依赖性前列腺癌细胞(例如PC-3和DU145)对 TNF-α不敏感，而雄激素-敏感性前列腺癌细胞(例如LNCaP)是TNF-α敏 感性的。在许多癌细胞中，对TNF-α和许多已知的化学治疗剂的促凋亡 作用的抗性与NF-κB的组成型活化相关。Muenchen等.，(Clin.Cancer Res. 2000，6：1969-1977)证明用IκBα“超级抑制剂”(p6R-IκB_S32A+S36A)抑制 NF-κB使得先前对TNF-α作用不敏感的前列腺癌细胞变得敏感。在大多 数细胞类型中，NF-κB以潜在的、没有活性的形式组成型地存在于细胞质 中，它通过与IκB蛋白相互作用而保留在细胞质中，所述IκB蛋白与NF-κB 结合并且掩饰其核定位序列(NLS)。在一些细胞类型中，NF-κB被组成型 地活化。NF-κB在细胞中的活化包括IκB的遍在蛋白化作用，以致它被 26S蛋白酶体降解。去除IκB暴露了NLS，并且导致NF-κB向细胞核的 移动，在这里它起作用保护细胞免受程序性细胞死亡。

NF-κB的组成型活化已经在各种组织中得到报道，包括，例如，胸腺、 胰腺、肝脏、膀胱、肺、肾和卵巢。成神经细胞瘤、霍奇金淋巴瘤、急性 淋巴母细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、伯基特淋 巴瘤和多发性骨髓瘤是与NF-κB的组成型活化相关的癌症。还已经证明 对NF-κB核移动的抑制在使得多发性骨髓瘤对多柔比星的促凋亡作用敏 感中具有某种作用(Mitsiades等，Blood，(June2002)99：4079-4086)。因此， NF-κB活化成为提高癌症治疗的靶点。

对于癌症治疗，优选地应用靶点特异性药剂，并且开发增加癌细胞的 破坏而对正常细胞没有类似影响的药剂。特别需要的是用于对目前的治疗 模式表现出抗性并且因而具有增加的死亡率的那些癌症的新型药剂。

发明概述

本发明涉及包括大约6-大约50个残基的细胞透过性(cell-permeable) 肽的多肽，所述细胞透过性肽包括至少SEQ ID NO：1的6个连续的残基 和NF-κB核定位序列。本发明还涉及包括大约11-大约50个残基的细胞 透过性肽的多肽，所述细胞透过性肽包括SEQ ID NO：2的至少11个连续 的残基和NF-κB核定位序列。NF-κB的核定位序列(NLS)可以包括，例如， p50、p65或它们的功能等价物。本发明还提供在细胞中抑制NF-κB核易 位的方法，其包括给细胞施用有效量的包括SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4 或其组合的肽。所述方法可以治疗性地用于各种疾病状态或代谢异常，其 中特别是NF-κB核易位和NF-κB的组成型活化起显著作用。