[发明专利]树突细胞肿瘤注射（DCTI）疗法

说明书

与相关申请案的交叉参考

本申请案要求于2004年9月17日申请的暂时申请案60/610,822的优先权。

发明领域

本发明涉及肿瘤治疗，所述的疗法包括将未成熟的树突细胞和佐剂直接注射进患者(人或动物)的肿瘤组织中，所述的肿瘤组织在注射时呈递抗原性为疫苗抗原。这些元件在肿瘤组织内的复合快速诱导并激活患者的免疫系统而显著减少和/或消除肿瘤细胞。大多数增加免疫应答的佐剂可与未成熟的树突细胞一起直接注射进肿瘤组织来获得肿瘤组织的减少或消除。

发明背景

免疫学佐剂与疫苗结合使用来增强对抗原的免疫应答。免疫学佐剂发挥功能的一种方式是吸引巨噬细胞至抗原，这样所述巨噬细胞可以将所述抗原呈递至局部淋巴结并起始有效的抗原反应。佐剂也可以本身作为抗原的载体，或可以通过其它机制(如储库效果、细胞因子诱导、补体激活、免疫学系统不同细胞群的募集、抗原递送至不同的抗原呈递细胞、I型或II型HLA分子表达的调控以及刺激产生不同的抗体亚型)来影响免疫应答。许多更新的疫苗仅是弱免疫原性的并因而需要佐剂的存在。

具有佐剂活性的材料是熟知的。明矾(Al(OH)₃)和类似的铝凝胶是批准用于人使用的佐剂。明矾的佐剂活性首先在1962年由Glenny发现(Chemistry and Industry，Jun.15，1926；J.Path.Bacteriol，34，267)。氢氧化铝和磷酸铝(通常统称为明矾)常规上在人和兽用疫苗中用作佐剂。明矾在对抗白喉和破伤风毒素中增强抗体的效力得以很好的确立并且最近，已经将明矾用作HBsAg疫苗的佐剂。

开发佐剂的研究的一方面已经指向树突细胞的研究。树突细胞(DC)是专职性抗原呈递细胞(APC)，其具有起始体内和体外初级免疫应答的独特能力。它们源于骨髓(DC1)或淋巴(DC2)前体并且以它们的未成熟形式分布在整个通常遭遇环境病原体的组织体(皮肤、粘膜、肠上皮等)。然而，DC1和DC2只占小百分比的外周循环中的单核细胞总数，CD14+/CD11c+/HLA-DR+单核细胞形式的DC1前体相对丰富，构成了约10％-15％的单核血细胞。

未成熟的DC表达大量涉及抗原获取、DC活化/成熟和抗原递呈的表面结构。一旦DC遇到抗原，它们则进行成熟过程，所述的成熟过程的特征是I型和II型HLA分子以及共刺激分子的上调，并且与T和B淋巴细胞上的相关受体相互作用，导致抗原特异性细胞和体液免疫应答的产生。

DC被认为是免疫系统中的初级APC。分离这些细胞和/或它们的前体以及在体外研究它们的能力已经对它们在先天性和获得性免疫性中的作用的认识增加了相当的深度。体外产生人DC的典型的手段是从外周循环分离并富集CD 14+单核细胞并在GM-CSF和IL-4中将它们培养不同时间，随后用一系列细胞因子(包括IL-2、IL-6、IL-7、IL-13、IL-15、TNFα，IL-10)或用多种其它试剂包括脂多糖、PGE₂、1型干扰素或双链RNA进行最后的成熟。

许多研究者已经表明这些体外产生的源于单核细胞的DC为有效的能起始初始和记忆性抗原-特异性CD4+和CD8+T细胞应答的抗原呈递细胞(APC)。最近的体外研究已经得到了更丰富的关于DC1的生物学信息并有助于说明体内产生抗原特异性免疫应答的过程。在外周组织中，未成熟的DC在危险信号的背景下获取抗原物质，起始了由DC与附近其它细胞类型产生的复杂的细胞因子/趋化因子环境。由DC产生的可溶性介体(mediator)可以以自分泌或旁分泌的方式起作用。与结合抗原的DC相互作用后，T细胞产生另外的细胞因子和趋化因子，由释放的所述细胞因子激活的其它免疫细胞也一样。这种相互作用的复杂网络依次产生促进DC细胞从它们的单核细胞前体产生的环境。

据认为，那些促进树突细胞成熟的佐剂，当与疫苗抗原结合施用时，将导致更多将所述疫苗抗原呈递至T淋巴细胞和B细胞的抗原呈递细胞，因而促进了对所述疫苗抗原的免疫应答。然而，因为APC的抗原性总是进行抗原性漂移和/或抗原性转变的演变，最有效的疫苗抗原的分离相当困难，因而许多较新的疫苗即使存在树突细胞和佐剂也仅是弱免疫原性的。在治疗过程中对抗活肿瘤细胞的最有效的疫苗抗原应该与树突细胞和佐剂一起使用来促进和诱导更强的免疫原性。

发明描述

本发明通过提供与树突细胞和佐剂一起的最有效的抗原疫苗抗原来增加对抗肿瘤细胞的免疫应答的量和质量而解决上述需要。