[发明专利]成熟树突细胞组合物及其培养方法

权利要求书

1.一种制备成熟树突细胞的方法，所述方法包括以下的顺序步 骤：

(a)在TNF-αR激动剂存在下用含干扰素γ受体(IFN-γR)激动剂的 第一信号向分离的不成熟树突细胞传导信号，以产生CD83⁺成熟的树 突细胞；和

(b)用含有效量的CD40激动剂的第二瞬时信号向所述CD83⁺成熟 的树突细胞传导信号，以产生CD83⁺CCR7⁺成熟树突细胞；其中，在 起始所述第一信号后约12-30小时通过电穿孔用CD40L mRNA转染 所述树突细胞给予所述第二瞬时信号。

2.权利要求1的方法，所述方法还包括使所述不成熟树突细胞或 所述已传导信号的树突细胞与PGE₂接触。

3.权利要求1的方法，其中所述(a)和(b)步骤还包括使所述细胞 与GM-CSF和IL-4或IL-13中的至少一种接触。

4.权利要求1的方法，其中所述CD40L mRNA编码含SEQ ID  NO：2的多肽。

5.权利要求1的方法，其中所述CD40L mRNA编码含SEQ ID  NO：10的多肽。

6.权利要求1的方法，其中所述mRNA编码CD40L多肽，并包 含选自以下的多核苷酸：

a)SEQ ID NO：1的多核苷酸；

b)含SEQ ID NO：1的核苷酸40-822的多核苷酸；

c)SEQ ID NO：9的多核苷酸；

d)SEQ ID NO：13的多核苷酸；

e)多核苷酸(a)、(b)、(c)或(d)，其还包含选自SEQ ID NO：14、 15、16、17或18的核酸的3′非翻译序列和/或选自SEQ ID NO：19、20、 21、22或23的核酸的5′非翻译序列。

7.权利要求1的方法，其中所述CCR7⁺成熟树突细胞分泌0-500 pg IL-10/10⁶树突细胞。

8.权利要求1的方法，其中所述CCR7⁺成熟树突细胞分泌IL-12 p70蛋白。

9.权利要求1的方法，其中所述不成熟树突细胞由外周血单核细 胞制备。

10.权利要求9的方法，其中在IL-4和/或IL-13存在下通过使所 述外周血单核细胞与GM-CSF接触制备所述不成熟树突细胞。

11.权利要求1的方法，其中所述IFN-γR激动剂是IFN-γ。

12.权利要求11的方法，其中所述IFN-γ具有SEQ ID NO：6的序 列。

13.权利要求1的方法，所述方法还包括将一种或多种抗原或编 码一种或多种抗原的多核苷酸导入所述不成熟树突细胞、已传导信号 的树突细胞或CCR7⁺成熟树突细胞中，以产生载荷抗原的CCR7⁺成熟 树突细胞。

14.权利要求13的方法，其中所述抗原选自：病原体、病原体裂 解物、病原体提取物、病原体多肽、癌细胞、癌细胞裂解物、癌细胞 提取物、癌细胞特异性多肽。

15.权利要求13的方法，其中将编码所述抗原的多核苷酸导入到 所述不成熟树突细胞、已传导信号的树突细胞或CCR7⁺成熟树突细胞 中。

16.权利要求15的方法，其中所述多核苷酸通过电穿孔导入。

17.权利要求15的方法，其中所述多核苷酸为mRNA。

18.权利要求15的方法，其中所述编码抗原的mRNA与编码 CD40激动剂的mRNA一起导入。

19.权利要求13的方法，其中所述抗原或多核苷酸在所述第一信 号之前导入。