[发明专利]通过信使RNA干扰酶促进活细胞内的单蛋白生成

权利要求书

1.用于在可转化的活大肠杆菌细胞内表达单个靶蛋白同时减少非目标细胞蛋白合成的系统，包括：

(a)包括具有至少一个MazF识别序列的细胞mRNA的分离的可转化的活大肠杆菌细胞；

(b)包括编码MazF多肽的分离的核酸序列的第一表达载体，其中通过用备选的三联密码子序列替换MazF识别序列突变了编码MazF多肽的分离的核酸序列，以生成编码所述MazF多肽的突变的核酸序列；

(c)包括编码靶蛋白的分离的核酸序列的第二表达载体，其中通过用备选的三联密码子序列替换MazF识别序列突变了编码靶蛋白的分离的核酸序列，以生成编码靶蛋白的突变的核酸序列；

其中用第一表达载体和第二表达载体转化分离的细胞；以及

其中将分离的细胞维持在容许在所述细胞内表达靶蛋白的条件下。

2.权利要求1的系统，其中第一和第二表达载体各自还包括至少一个调节序列。

3.权利要求2的系统，其中所述至少一个调节序列是至少一个诱导型启动子。

4.权利要求3的系统，其中第一表达载体中的所述至少一个诱导型启动子与编码MazF多肽的突变的核酸序列可操纵地连接。

5.权利要求3的系统，其中第二表达载体中的所述至少一个诱导型启动子与编码靶蛋白的突变的核酸序列可操纵地连接。

6.权利要求1的系统，其中(b)中的突变的核酸序列编码MazF多肽。

7.权利要求1的系统，其中当在细胞内表达时MazF多肽识别细胞信使RNA中的至少一个MazF识别序列。

8.权利要求1的系统，其中MazF多肽选择性地切割细胞信使RNA，由此减少非目标细胞蛋白合成。

9.权利要求1的系统，其中MazF识别序列是腺嘌呤-胞嘧啶-腺嘌呤。

10.权利要求1的系统，其中表达的编码靶蛋白的信使RNA被稳定地保持于细胞中。

11.权利要求1的系统，其中编码靶蛋白的突变的核酸序列还被突变成用偏爱密码子替换罕见密码子，以生成二次突变的核酸序列，其中所述二次突变的核酸序列编码靶蛋白。

12.权利要求11的系统，其中编码靶蛋白的二次突变的核酸序列包括与编码靶蛋白的二次突变的核酸序列可操纵地连接的诱导型启动子。

13.权利要求11的系统，其中表达的编码靶蛋白的信使RNA被稳定地保持于细胞中。

14.权利要求1的系统，其中编码MazF多肽的突变的核酸序列还被突变成用偏爱密码子替换罕见密码子，以生成二次突变的核酸序列，其中所述二次突变的核酸序列编码MazF多肽。

15.权利要求14的系统，其中编码MazF多肽的二次突变的核酸序列包括与编码MazF多肽的二次突变的核酸序列可操纵地连接的诱导型启动子。

16.权利要求1的系统，其中靶蛋白是哺乳动物蛋白。

17.权利要求16的系统，其中哺乳动物蛋白是人类蛋白。

18.权利要求1的系统，其中靶蛋白是酵母蛋白。

19.权利要求1的系统，其中靶蛋白是较少的细菌蛋白。

20.权利要求19的系统，其中靶蛋白是毒性低丰度蛋白。

21.权利要求1的系统，其中细胞被保持于包括至少一种放射性标记的同位素的培养基中。

22.权利要求21的系统，其中当表达时，蛋白是被放射性标记的。

23.权利要求1的系统，其中通过聚合酶链式反应扩增编码靶蛋白的分离的核酸序列。