[发明专利]增强SALICORNIA BRACHIATA提取物的抗结核活性

权利要求书

1.具有抗结核活性的活性组分F2的生物活性亚组分SF3-K，其中 SF3-K通过包括以下步骤的方法获得：

(i)在完全成熟阶段采集Salicornia brachiata植物材料；

在25-37℃的室温下洗涤和干燥该植物材料，同时将水分保持在 0.5-1.5％；

通过研磨减少该植物材料的大小，并选择16-20网目筛大小的材料；

将该植物材料浸泡在去离子水中，加热至80℃-90℃的温度，并用 新的去离子水以24小时的间隔重复该浸泡步骤5次；

通过常规的技术或草药浓缩器技术浓缩所述提取物；

在-50℃至-60℃的温度下，将所浓缩的提取物冻干8-16小时，以便 回收粗品，收率为18-20％；

将所述提取物分离为5个组分，丁醇中的F1、1∶1甲醇-氯仿中的F2、 甲醇中的F3、1∶1甲醇-水中的F4和水中的F5；

(ii)将所述F2生物活性组分在采用RP-18柱的半制备HPLC上进行 亚分离，以03∶97::CH₃CN∶H₂O为流动相，流速为7mL/分钟，

(iii)在所述半制备HPLC的0至22分钟之间收集7个亚组分SF1、 SF2、SF3、SF4、SF5、SF6和SF7；

(iv)将步骤(iii)中得到的所述亚组分进行抗结核筛选；

(v)根据亚组分的活性和所得物质的量，将所述亚组分SF3鉴别为 最佳折衷物；

(vi)将在步骤(v)中得到的所述亚组分浓缩，并在除了流速改为6mL/ 分钟以外，所有条件均相同的半制备柱上进行再次色谱分析，以增强峰 的纯度，所述峰在流速6mL/分钟的半制备柱上具有11.89分钟的保留时 间，在流速1mL/分钟的分析柱上具有2.95分钟的保留时间；

(vii)将步骤(vi)中获得的组分浓缩，并经冻干得到SF3-K。

2.如权利要求1所述的生物活性亚组分SF3-K，其中SF3-K在高达 50℃的温度下至少稳定4小时。

3.如权利要求1所述的生物活性亚组分SF3-K，其中当用含有 OADC的7H10Middlebrook’s培养基进行评估时，所述生物活性亚组分 SF3-K显示抗结核分枝杆菌H37Rv的MIC值小于等于3.125μg/mL。

4.如权利要求1所述的生物活性亚组分SF3-K，其中当用BACTEC 方法进行体外评估时，所述生物活性亚组分SF3-K在50μg/mL和100 μg/mL的剂量时显示对结核分枝杆菌H37Rv的完全抑制作用，并还显示 生长指数的剂量依赖性。

5.如权利要求1所述的生物活性亚组分SF3-K，其中所述生物活性 亚组分SF3-K还在体内具有活性，并且当感染后将SF3-K以等于50 mg/kg体重的剂量口服给药12天时，所述生物活性亚组分SF3-K使受感 染小鼠的平均存活时间增加5天。

6.如权利要求1所述的生物活性亚组分SF3-K，其中亚组分SF3-K 在用VERO细胞系进行的测试中，即使剂量高达100μg/mL，即超过 SF3-K的MIC值的十倍，也不表现细胞毒性。

7.如权利要求1所述的生物活性亚组分SF3-K，其中所述亚组分 SF3-K对将其以高达50mg/kg体重的剂量口服给药的健康小鼠不表现毒 性。

8.如权利要求1所述的生物活性亚组分SF3-K，其中根据带有RI 检测的HPLC，所述SF3K的主要成分包含至所述组分重量75％-80％的 程度的蔗糖。

9.如权利要求8所述的生物活性亚组分SF3-K，其中当检测到剂量 为100μg/mL时，所述主要成分蔗糖同纯蔗糖一样没有显示抗结核活性 的任何活性。

10.如权利要求8所述的生物活性亚组分SF3-K，其中最突出的次要 成分表现出m/z值为118[117+H]⁺和140[117+Na⁺]，对应分子量为117的 成分。