[发明专利]通用快捷的免疫检测法及试剂和试剂盒

说明书

技术领域

本发明关于快捷检测蛋白的方法，试剂和试剂盒，适用于免疫检测领域。

背景技术

免疫检测或者免疫测定是一种检测特异蛋白(例如，抗原，抗体，受体蛋白，配体)的非 常有力和灵敏的方法.两种非常典型的免疫检测法：酶联免疫吸收分析(ELISA)及免疫印迹 法检测(Western Blot)开发于1970年代。随后由于辣根过氧化氢酶(HRP)-共轭抗体和碱性 磷酸酶(AP)-共轭抗体的成功的开发，免疫检测法才被广泛地用于特异蛋白的定性和定量分 析。

现行常规的免疫检测程序(例如免疫印迹法)包括7步：1.封闭，2.洗涤，3.一级抗体结 合，4.洗涤，5.二级抗体结合，6.再洗涤，7.发色(使用colorimetric、autoradiographic 或者chemiluminescent).全部过程是费时、费力，通常要花费约5至7小时才能完成，因 此开发一个相对简单快捷的免疫检测法是很有必要的。

现在已有不少关于改进该方面技术的报导。但这些改进大致可分为下述几类：1.使用预 包埋并且预封闭的固相(例如，Osther等，美国专利4,885,235；Osther等，美国专利5, 093,230；Urnovitz’s美国专利5,447,837；Ralls等，美国专利6,015,681)；2.使 用预标记的一级抗体(例如，Pegg等，美国专利5,212,065；Ralls等，美国专利6,015, 681；Ralls等，美国专利6,599,691；Stewart’s，美国专利6,503,702；Slack等，WO 03/052379；Cullum等，WO 2005/003376)；3.使用特别或者附加的设备(例如，Peg等， 美国专利5,212,065；Slack等，WO 03/052379；Tung等，美国专利6,627,459；Ralls 等，WO 97/05486)。然而，使用预标记的一级抗体的方法会降低检测灵敏度并减少选择一级 抗体的灵活性，而且预标记一级抗体通常很昂贵且非常受来源限制，只有相当有限的预标记 一级抗体在市场上可以买到。上述报导的所谓改进的免疫检测方法的最大界限是他们不通用 的，仅仅适于检测一种或者一组特定蛋白(抗原或抗体)，有些方法仍然不可免除那些耗时的 步骤：封闭，一级抗体结合，二级抗体结合。

本发明提供一种通用的快捷的免疫检测方法。该方法在免疫检测中至少合并以下步骤： 封闭，抗原结合，一级抗体(Primary Antibody)结合，二级抗体(酶-共轭的探查抗体， Secondary Antibody)结合，中的任何两个步骤为一个快捷步骤.该本发明的最显著特征是 将封闭，一级抗体结合及二级抗体结合这三个步骤合并成一步快捷反应。因此根据本发明开 发的免疫检测的整个程序只要三个步骤：1)一步快捷反应，2)洗涤，及3)显色。整个过 程花费不到一个小时。

发明内容

本发明涉及一种通用快捷的免疫检测法及试剂和试剂盒。其优点是：1快捷，只要仅 仅0.5-1小时(常规的免疫检测要5～7小时)。2容易，只要一个步骤反应而不是一个多 步骤程序。3适合，适于自动的分析和手动分析。4具有常规免疫检测方法相似的灵敏度。 5花费低，有效率，抗体和试剂，分析体制稳定并且可重复使用。6简单，一步直接了断的 过程，不需要标记一级抗体，不需要额外仪器和专门技能，也没有错综复杂的操作的过程。 7通用，适于绝大多数一级抗体，且适用于不同的种免疫检测，例如基于抗体-抗原反应的常 规的免疫检测(Western Blot，ELISA和immunohistochemistry)，以及其它与抗体-抗原反应原 理相似的分析(例如，基于受体蛋白-配体反应的检测方法)。本发明为Western Blot，ELISA， IHC/ICC及其它免疫检测提供了一项生产快捷免疫检测试剂盒的技术，也为现有的免疫检测 试剂盒提供了改进的方法。

本发明涉及一种非特异性竞争剂的使用方法。非特异性竞争剂是一种不被使用在一个免 疫检测系统中一级抗体或者二级抗体(或者受体蛋白或配体)所识别的非特异性蛋白或分子， 使用该方法，免疫检测中的封闭步骤可以被忽略也不需要使用预封闭的固相。

本发明涉及的非特异性竞争剂的用法是一种与在免疫检测系统中使用含有高浓度非特异 性竞争剂的方法。