[发明专利]来源于转基因植物细胞的稳定免疫预防性和治疗性组合物及其制备方法

权利要求书

1.制备免疫保护性颗粒或生物活性蛋白质颗粒的方法，包括步骤：

a)用编码至少一种免疫保护性抗原或至少一种生物活性蛋白质的多核苷酸转化植物细胞；

b)在允许所述转化的植物细胞增殖以及所述免疫保护性颗粒或所述生物活性蛋白质在该植物细胞中积累的条件下培养该转化的植物细胞；

c)收集并洗涤该培养的转化细胞；

d)将该洗涤的转化细胞重新悬浮在裂解缓冲液中；

e)物理或机械方式破碎该重悬浮的细胞以形成免疫保护性颗粒或生物活性蛋白质颗粒；并

f)将所述免疫保护性颗粒或所述生物活性蛋白质颗粒与细胞碎片分开。

2.权利要求1的方法，其中转化的植物细胞选自低等植物细胞、单子叶植物细胞和双子叶植物细胞。

3.权利要求2的方法，其中转化的植物细胞是烟草细胞系培养物。

4.权利要求1的方法，其中所述免疫保护性颗粒或生物活性蛋白质颗粒来源于所述转化植物细胞的晚指数生长和稳定生长期。

5.权利要求1的方法，其中通过超声、微流化或其它剪切类方法、高剪切转子/定子方法、弗氏压碎器或其它压碎方法或者匀浆来实施所述物理或机械破碎。

6.权利要求5的方法，其中通过不超过20秒的超声来实施所述物理或机械破碎。

7.权利要求1的方法，其中所述方法步骤在缺少强去污剂或其它破碎细胞的化学试剂存在下进行。

8.权利要求1的方法，其中免疫保护性抗原是来自禽病毒的蛋白质。

9.权利要求1的方法，其中免疫保护性抗原选自：来自新城疫病毒(NDV)的血凝素/神经氨酸酶蛋白质、来自禽流感病毒(AIV)的血凝素蛋白质和来自传染性法式囊病病毒的VP2蛋白质。

10.权利要求1的方法，其中免疫保护性抗原选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：12。

11.权利要求1的方法，其中所述植物细胞选自NT-1、BY-2、CHN-18、CHA-13、CVP2和MHN-41。

12.权利要求1的方法，其中所述多核苷酸编码亚单位疫苗。

13.权利要求1的方法，其中所述生物活性蛋白质选自：酶、毒素、细胞受体、配体、信号转导剂、细胞因子。

14.权利要求1的方法，还包括回收含有已经与细胞碎片分离的所述免疫保护性颗粒或生物活性蛋白质颗粒的上清液。

15.权利要求1的方法，还包括从所述免疫保护性颗粒或生物活性蛋白质颗粒分离可溶的稳定的生物活性蛋白质。

16.权利要求14的方法，还包括从所述上清液分离可溶的稳定的生物活性蛋白质或免疫保护性蛋白质。

17.根据权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16的方法制备的分离的免疫保护性颗粒或生物活性蛋白质颗粒。

18.组合物，其包含与一种或多种可药用佐剂、稀释剂、载体或赋形剂混合的根据权利要求17的免疫保护性颗粒或生物活性蛋白质颗粒。

19.权利要求18的组合物，其中免疫保护性颗粒包含至少一种免疫保护性抗原。

20.权利要求19的组合物，其中免疫保护性抗原选自：来自新城疫病毒(NDV)的血凝素/神经氨酸酶蛋白质、来自禽流感病毒(AIV)的血凝素蛋白质和来自传染性法式囊病病毒的VP2蛋白质。

21.权利要求20的组合物，其中免疫保护性抗原选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：12。

22.接种或免疫动物的方法，包括向动物或人施用权利要求18的组合物，其中该组合物的给药量足以接种、免疫、刺激免疫应答、刺激特异性抗体产生，或者刺激细胞免疫应答。

23.权利要求22的方法，其中所述组合物提供选自新城疫病毒(NDV)的血凝素/神经氨酸酶蛋白质、禽流感病毒(AIV)的血凝素蛋白质和传染性法式囊病病毒的VP2蛋白质的免疫保护性抗原。

24.权利要求22的方法，其中所述组合物通过肌内、静脉内、口服、鼻、粘膜或皮下途径施用。