[发明专利]系列新型药物载体、新型载体－酪氨酸羟化酶融合蛋白及其制备

说明书

技术领域：

本发明涉及肽化学领域，更具体讲，涉及一种新型载体及其制备和用途，以及新型载体-酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase，TH)融合蛋白的制备和用途。

背景技术：

迄今为止，大多数药物由于人体生理屏障的选择性通透作用，特别是细胞膜、血脑屏障、胎盘屏障、血睾屏障等，使得药物不能直接到达病变部位，大大减少了药物在机体内的药效，限制了药物对疾病的治疗，影响了疗效。

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一种多见于中老年人的中枢神经系统推行性疾病，其主要的病理特征为人脑的黑质多巴胺(dopamine，DA)能神经元变性坏死，使通过黑质一纹状体通路运送到纹状体的DA显著减少，因而出现震颤、少动、肌强直等临床症状。口服补充DA的前体物质左旋多巴(L-DOPA)是目前最为有效的治疗措施，但一般在服药3-5年后疗效就显著下降并出现严重毒副作用。研究发现：细胞膜穿透肽(membrane penetrating peptide，MPP)可以穿透细胞膜、细胞核膜等人体生理屏障，将其与药物结合提高药物到达病变部位的量，发挥更高的药效。将MPP的穿膜特性应用在药物治疗疾病方面，具有重要的的临床价值。

本发明的目的，在于提供一种新型有效的膜穿透载体，具有膜穿透功能的蛋白多肽，制备PMPV-TH融合蛋白，以期在临床治疗中，提高药物到达病变部位的量，更好地发挥治疗作用。

发明内容：

本发明提供被称为“多肽介导穿透载体(Peptide-mediatedpenetrating vector，PMPV)”的新型药物载体，可以携带外源性酪氨酸羟化酶(TH)到达人脑病变部位，在TH作用下，人脑黑质生成多巴胺增加，达到治疗疾病的目的。

本发明提供的新型药物载体PMPV——属于MPP家族，包括一系列的多肽及蛋白，具有直接穿透细胞膜、细胞核膜的功能，可以结合药物直接穿透细胞膜、血脑屏障、胎盘屏障、血睾屏障发挥药效，具有MPP的特性：1、非能量依赖性；2、非受体依赖性；3、非经典内吞及外排作用；4、可以与其它较大分子的多肽、蛋白质、核酸、质粒结合并保存生物穿膜活性等。其结构式为A-B-C(1)表示的PMPV或其药学上可接受的盐、酯或前体化合物，其中A为不存在或为氮保护基团，C为任意氨基酸序列、核酸序列或其它分子，B为13个赖氨酸构成的基团。

本发明提供的PMPV-TH融合蛋白是指包含从2个或多个单独的蛋白取出的氨基酸编码序列连接，使得这两个(或更多)读框在同一读框内，通过表达这样一个多核苷酸形成融合蛋白，包括结构式A-B-G-C(2)表示的PMPV-TH融合蛋白或其药学上可接受的盐、酯或前体药物，其中A为不存在或氮保护基团，C为不存在或羧酸保护基团，B为具有PMPV活性的基团，G为具有TH活性的基团。

本发明范围内认定的序列包括特征为氨基酸残基序列或类型改变的那些类似物序列，其中所述改变不改变上述PMPV和/或融合蛋白的基本性质和生物学活性。

本发明也包括一组合物，包含分离的编码PMPV或融合蛋白的单链或双链的核酸序列，最好是DNA分子，也包括含有编码PMPV或融合蛋白的DNA序列的载体，其中该载体存在于细胞中时，能够表达PMPV或融合蛋白。本发明还包括含有该载体的细胞的组合物，其中所述载体含有编码PMPV或融合蛋白的DNA序列。

本发明主要用于药物治疗疾病时，新型药物载体介导药物通过人体生理屏障进入病变部位发挥药效，特别是治疗帕金森病时使用PMPV-TH融合蛋白，使TH可以顺利通过血脑屏障到达病变部位，治疗帕金森病。

本发明的要点在于该药物载体PMPV和PMPV-TH的融合蛋白及其制备，从而建立一种具有穿膜作用和其它生物学功效的双重功能的新分子组合蛋白，建立穿膜生物活性蛋白体系。

实施例1  制备PMPV基因载体：

1).制备PMPV基因：

即13个赖氨酸基因串联制备——委托上海生工有限公司制备。

2).PMPV基因与载体结合形成PMPV基因载体：

载体TransVectortm由Q.BIO gene公司提供。