[发明专利]用于生物学细胞的鉴定和计数的方法及试剂

权利要求书

1.一种用于鉴定和计数样品特别是血样中的生物学细胞的试剂，其特征在于它包含：

-一种选自于至少一种浓度足以使样品中给定类型细胞发生特异性裂解的去垢剂的细胞裂解剂，和

-一种能标记剩余未裂解细胞内核酸的染料。

2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于细胞裂解剂包含至少一种浓度足够能使红血球裂解的离子和/或非离子去垢剂。

3.根据权利要求1或2所述的试剂，其特征在于去垢剂选自于：

-一级胺，醋酸胺和氯化铵，四铵盐，和三甲乙基溴化铵；

-取代二胺的酰胺，二乙醇氨基丙基胺或二乙基氨基丙基酰胺，环二亚乙基三胺的酰胺；

-烷基芳基磺酸盐，石油磺酸盐，磺酸甘油酯；

-乙醇酰胺，磺基三甲铵乙内酯；

-烷基糖苷，皂苷；

-聚氧化乙烯醚和脱水山梨醇，聚乙二醇醚。

4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂，其特征在于染料是一种荧光型染料。

5.根据权利要求1-4任一项所述的试剂，其特征在于荧光染料能与胞内核糖核酸特异性结合，一旦结合后这种染料的荧光性将会增强。

6.  根据权利要求1-5任一项所述的试剂，其特征在于染料选自于：

-噻唑橙或1-甲基-4-[(3-甲基-2-(3H)-苯并噻唑亚基)甲基]喹啉P-甲苯磺盐；

-噻唑蓝；

-4-[(3-甲基-2-(3H)-苯并噻唑基亚基)甲基]-1-[3-(三甲铵)丙基]喹啉二碘化物；

-3，3’-二甲基氧杂羰花青碘化物或3’-甲基-2-2[3-(3-甲基-2(3H)-苯并噻唑亚基)-1-丙基]苯并噁唑碘化物；

-硫黄素T；

-染料SYTO和TOTO(TM分子探针)；

-溴化3，8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲啶鎓；

-propidium碘化物

-吖啶橙；

-coriphosphine O；

-金胺O；

-染料HOECHST 33258和HOECHST 33342；

-4’，6-二氨基-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)；

-4’，6-(二咪唑啉-2-基)-2-苯基吲哚二盐酸盐(DIPI)；

-7-氨基放射菌素D；

-放射菌素D，和

-LDS 751。

7.根据权利要求1-6任一项所述的试剂，其特征在于它还至少包含一种能够促进染料渗透进入被标记的细胞的膜渗透剂。

8.根据权利要求7所述的试剂，其特征在于能促进膜渗透的试剂是一种负荷质子的离子载体化合物和/或抗生素类。

9.根据权利要求1-8任一项所述的试剂，其特征在于它还包含至少一种浓度为0.1％-10％(w/v)的膜固定剂。

10.根据权利要求9所述的试剂，其特征在于膜固定剂包含至少一种醇和/或一种选自于低聚甲醛或戊二醛的醛。

11.根据权利要求1-10任一项所述的试剂，其特征在于它还包含至少一种选自复合剂、无机盐和缓冲液体系的化合物。

12.一种鉴定和计数样品尤其是血样中生物学细胞的方法，该方法包括以下的操作步骤：

-将样品与权利要求1-11中任一种试剂混合、温育，从而在单个步中使得给定类型细胞尤其是红血球发生裂解、胞内核酸染上色和有核细胞能够固定；

-用流式细胞计数方法测定上述反应后的溶液，其中采用至少两个测定参数，如抵抗力、轴的发光衍射，轴的发光反射、直角的发光导入和荧光性；和

-根据参数对群体中的有核细胞进行分类和计数。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于抵抗力通过至少一种选自于持续电流和脉冲或交替电流来测定。

14.根据权利要求12或13所述的方法，其特征在于轴的发光衍射参数是一个至少选自于小角度衍射和大角度衍射的的参数。

15.根据权利要求12-14任一项所述的方法，其特征在于被分类的有核细胞可以是成熟或未成熟细胞，正常或异常细胞。