[发明专利]一种利用沙眼衣原体单克隆抗体来检测沙眼衣原体的方法

说明书

发明领域

本发明涉及利用沙眼衣原体(CT)单克隆抗体制备的ELISA检测试剂和胶体金检测试剂，以及涉及利用沙眼衣原体单克隆抗体来检测沙眼衣原体的方法。背景技术

沙眼衣原体是人类眼部和生殖道感染的主要致病体。沙眼衣原体包括18个血清型，其中A、B、Ba、C四型可引起沙眼，是发展中国家的主要致盲原因，其中D-K型是西方世界生殖道感染最常见的病因。沙眼衣原体不仅与男性尿道炎、前列腺炎、附睾炎等有一定的关系，亦可引起女性子宫颈炎、子宫内膜炎、输卵管炎等，从而导致不孕，异位妊娠及流产。因其普遍的流行性及高度的危害性引起了医疗界广大同仁的注意。自1982年stephens首次成功地制备抗沙眼衣原体的单克隆抗体以来，单克隆抗体成为研究沙眼衣原体不可缺少的试验材料，广泛应用于临床诊断、流行病学分型，以及沙眼衣原体诸膜抗原结构分析，致病机理探讨等方面，并且取得了许多重大进展。

目前，国内对沙眼衣原体的感染的实验室诊断以直接免疫荧光法和聚合酶链式反应(PCR)为主，且多为进口试剂，这两种方法本身的局限性限制了其在广大基层医院及防病部门的应用，使其难以成为一种临床常规检查项目及日常体检项目。酶免疫检测法以其快速、简单、经济、敏感、特异以及可同时检测大量标本而深受广大基层医院和卫生防病部门的欢迎及认可，本发明建立的双抗夹心酶联免疫吸附试验方法和胶体金检测方法将会满足这一需求。发明内容

本发明的目的是提供利用沙眼衣原体(CT)单克隆抗体的ELISA检测试剂和胶体金探针检测试剂，以及涉及利用沙眼衣原体单克隆抗体来检测沙眼衣原体的方法。

本发明的实验原理是：

将抗原或抗体接种细胞后(培养)，当细胞内有包涵体时，采用泛影葡胺密度梯度离心法纯化，纯化后注射免疫动物，然后取动物脾细胞及骨髓细胞融合进行筛选鉴定(用ELISA法)。

在固相载体上，酶标记抗原与相对应的抗原或抗体形成酶标记的Ag-Ab免疫复合物，在底物参与下，复合物上的酶催化剂底物使其水解或还原成另一种有色物质。由于在一定的条件下，酶的降解底物和呈现色泽是成正比的。因此，可以用酶标仪进行测定，从而计算出参与反应的Ag或Ab的含量。

或者将特异性抗原(或抗体)先固定于硝酸纤维素膜的一区带，将金标记物吸附在结合垫上。当待测样品(尿液或血清)加入到样品膜上之后中，由于微孔滤膜的毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗原(或抗体)的区域时，样品中相应在抗体(或抗原)即与抗原(或抗体)发生特异性结合，由于免疫胶体金可使该区域显示一定颜色，从而实现特异性的免疫诊断。

根据本发明的一个方面，提供了沙眼衣原体单克隆抗体细胞株的制备方法，包括：

A、制备沙眼衣原体抗原；

B、纯化抗原；

C、用纯化抗原致敏小鼠；

D、将致敏小鼠的脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞进行融合，得到杂交瘤细胞。

根据本发明的另一方面，提供了沙眼衣原体单克隆抗体，包括从上述杂交瘤细胞培养液中分离纯化单克隆抗体。

根据本发明的还一个方面，提供了利用上述沙眼衣原体单克隆抗体的ELISA法检测沙眼衣原体的检测试剂及方法。

根据本发明的还一个方面，提供了利用上述沙眼衣原体单克隆抗体的胶体金免疫纸层析检测法检测沙眼衣原体的检测试剂及方法。

                            实验1

一、材料：

1、CT标准抗原购置于中国医学科学院病毒研究所。

2、骨髓瘤细胞、HeIa-229及Mccoy购置于中国医学院病毒研究所。

3、RPMI-1640培养液、HAT培养液及HT培养液、聚乙二醇(PEG)溶液、GKN溶液，东丽区卫生防病站微生物室自制。

4、4-8周龄及8-12周龄的BALB/C小鼠，购置于中国医学科学院血液病研究所。

5、标本来源：

a天津市传染病医院性病专科门诊

b天津市长征医院中西医结合皮肤病研究所

c天津市民族医院性病专科门诊

6、固相载体：天津市有机玻璃厂生产聚苯乙烯板。

7、试剂：包被液、洗涤液、保温液、TMB底物液、终止液均为本课题组自制。

8、酶标仪：荷兰产Wellscan-MK-3型。

二、方法：

1、抗原制备。

a沙眼衣原体A型

b培养细胞：Hela-229细胞和Mccoy细胞

c培养基：RPMI-1640培养基