[发明专利]从生物活体中分离出的一种抗菌多肽

说明书

技术领域

本发明属于生物制品领域，采用生物化学方法从生物活体中分离出一种抗菌多肽，具体是从泥鳅中分离出一种抗菌多肽。

背景技术

抗菌肽(antimicrobialpeptides)是生物体中经诱导而合成的一种内源性多肽，在机体抵抗病原的入侵方面起着重要的作用，更被认为是缺乏特异性免疫功能生物的重要防御成分。抗菌肽的作用机理与常用的抗生素明显不同，它主要通过在细胞膜表面形成离子通道来杀死细菌，在目前细菌的抗药性明显增强，而寻找新的抗生素又极为困难的情况下，寻找新的抗菌肽具有重要意义。

泥鳅系鳅科动物，据《中药大辞典》等文献记载，泥鳅的肉或全体入药，归脾经，具有补脾益气，清热解毒、护肝退黄等功效，在中国民间，用新鲜泥鳅捣乱外敷治疗骨髓炎，乳痈等疾病已有数千年的历史(贾玉海著，蓝色本草-中国海洋湖沼药物学，北京学苑出版社，1996，p187)。但是国内外对泥鳅中的功效成分的报道一直较少。近年来有人报道了泥鳅中的一种含21个氨基酸的抗菌肽(Chan Baepark.FEBS Letters 411，173-178，1997)，其抗菌活性是目前世界上最强的抗菌肽蛙皮素的6倍；钦传光等人的专利申请“用泥鳅制成的护肝功能食品和防治肝炎药物及其制备方法”(专利号00114614.9)，报道了泥鳅中分离出的一种多糖，动物实验表明具有较好的护肝作用。从现有文献看来，一种分子量Mr约为9800，等电点PI约为4.78的具有抗菌活性的多肽还从未见报道。

发明内容

本发明从泥鳅中又分离出了一种新的具有抗菌活性的多肽MAPP。它的特征是：一种不含亚基的单链多肽，其分子量为9300～10300，等电点PI为4.68～4.88，N端序列标签为CFGWN。这种多肽能够对枯草杆菌、大肠杆菌等多种细菌表现出抑制作用。同时它对连苯三酚的自氧化也有较好的抑制作用。这种抗菌肽可用作无毒，无副作用的外用消炎药和食品防腐剂以及抗氧化剂。上述抗菌肽的分离方法如下：

分离过程A.取健康活的泥鳅制备成匀浆，匀浆真空干燥后经乙酸乙酯和丙酮分别处理得到淡黄色蛋白质样品。将该样品过Sephadex G-50柱收集最大洗脱峰，冻干后经DEAE-Cellulose 52阴离子交换层析收集第一个洗脱峰，冻干后经制备性非变性电泳分离。使用的上槽缓冲液为0.01～0.2M Tris-base，0.05～0.2MTricine，1～2mM SDS，在150V恒压条件下电泳至溴酚蓝前缘到达底部。取出薄片状的凝胶，在其边缘沿纵向切下0.5cm宽的胶条，用考马斯亮蓝染色并脱色。根据胶条上第二条带的位置切下薄片状的凝胶上相应位置处的凝胶条带，将该条带在非变性条件下进行电洗脱，洗脱液经充分透析后冻干即可得到纯净的MAPP。对MAPP进行鉴定(N末端序列标签、质谱指纹图或氨基酸组成分析)根据鉴定结果进行生物信息学检索。结果表明，MAPP是一个新的多肽。