[发明专利]以纤维蛋白为载体的注射型骨形态发生蛋白

说明书

一、所属领域

本发明涉及一种医学领域的蛋白注射剂，特别涉及一种用于临床骨折、骨不连、骨缺损等疾病治疗中可以注射使用的骨形态发生蛋白。

二、背景技术

骨形态发生蛋白的主要作用是促进未分化的间充质细胞和骨系细胞的募集和向成骨细胞分化。由于它具有高效的骨诱导活性，因此在促进骨折愈合、治疗骨缺损和骨不连方面有极好的临床应用前景。现有在临床使用的方法多为将骨形态发生蛋白复合在固体材料上，通过手术植入创伤部位，操作复杂，成本高，适用范围有限，尤其是对临床出现最多的闭合性骨折及其它不需要手术治疗的病例难以应用。

三、发明内容

根据上述现有技术部分存在的缺陷或不足，本发明的目的是，提供一种不仅可用于需要手术治疗的骨不连、骨缺损患者，还可以使用普通注射器经皮直接注射，因而可用所有伴有骨损伤的患者。具有使用范围广泛、操作简便、治疗效果好的人体纤维蛋白为载体的注射型骨形态发生蛋白。

为了实现上述目的，本发明采用的技术构思是，使用患者血液或血库健康成年人血液，通过低温离心法快速制备纤维蛋白原作为骨形态发生蛋白的载体，使用时通过凝血酶和抑肽酶的作用使纤维蛋白原/骨形态发生蛋白复合物在注射到体内后转化为纤维蛋白凝块。利用纤维蛋白凝块被机体缓慢吸收的特性使骨形态发生蛋白缓慢释放出来，从而使骨形态发生蛋白在创伤修复的全过程均发挥其生物学作用，达到诱导新骨形成和促进创伤修复的作用。

所采用的技术方案是：

以纤维蛋白为载体的注射型骨形态发生蛋白，按以下步骤制备：

1)从医院血库/血站获取健康成人抗凝血或治疗前无菌采取患者自体静脉血液；

2)3000RPM离心20分钟分离血浆，冷冻离心法提取纤维蛋白原，加入牛骨形态发生蛋白提取物，比例为(2～5)mg：1mg(纤维蛋白原：骨形态发生蛋白)；将上述混合物-40℃冻干制成絮状物备用；

3)将纤维蛋白原/骨形态发生蛋白混合物用生理盐水配成浓度为4mg/ml～8mg/ml的混悬液作为成分A；以氯化钙溶液配制浓度为250IU/ml～400IU/ml凝血酶溶液为成分B；

4)在成分B中加入浓度为0.5mg/ml～50mg/ml的抑肽酶。

本发明的另一特点是，所述的牛骨形态发生蛋白提取物，是从小牛新鲜皮质骨中按常规方法人工提取的多种骨形态发生蛋白混合物，主要步骤为脱脂、脱蛋白，盐酸胍、尿素抽提，常温下干燥，经小鼠肌袋实验证实具有骨诱导活性。

本发明利用纤维蛋白原的溶解特性可制成注射剂，因而不仅可用于需要手术治疗的骨不连、骨缺损患者，还可以使用普通注射器经皮直接注射，因而可用于所有伴有骨损伤的患者。使用时以等体积的成分A和成分B分别加入双筒注射器的两个筒内，在注射的过程中混匀即可。本发明具有使用范围广泛、操作简便、治疗效果确切等优点。从人血中提取纤维蛋白再用于人体，不存在免疫原性和排斥反应，植入体内后无不良反应。尤其是在治疗前抽取患者自体血液还可以避免血液疾病的传播。由于仅使用血液中的血浆成分，其它成分处理后可以回输给患者，因而对患者的血液系统不会有不良影响。纤维蛋白使用前为液态，可在体内迅速固化，可以任意塑型。同时，纤维蛋白的止血、粘接作用有利于防治局部血肿的形成，为骨的再生和愈合提供良好的局部环境。

四、具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步的详细描述。

实施例1：按本发明的技术方案，以纤维蛋白为载体的注射型骨形态发生蛋白，按以下步骤制备：

1)从医院血库/血站获取健康成人抗凝血或治疗前无菌采取患者自体静脉血液；

2)3000RPM离心20分钟分离血浆，冷冻离心法提取纤维蛋白原，加入牛骨形态发生蛋白提取物，比例为2mg∶1mg(纤维蛋白原∶骨形态发生蛋白)；将上述混合物-40℃冻干制成絮状物备用；

牛骨形态发生蛋白提取物，是从小牛新鲜皮质骨中按常规方法人工提取的多种骨形态发生蛋白混合物，主要步骤为脱脂、脱蛋白，盐酸胍、尿素抽提，常温下干燥，经小鼠肌袋实验证实具有骨诱导活性；

3)将纤维蛋白原/骨形态发生蛋白混合物用生理盐水配成浓度为8mg/ml的混悬液作为成分A；以氯化钙溶液配制浓度为250IU/ml凝血酶溶液为成分B；

4)在成分B中加入浓度为50mg/ml的抑肽酶。

实施例2：按本发明的技术方案，以纤维蛋白为载体的注射型骨形态发生蛋白，按以下步骤制备：

1)从医院血库/血站获取健康成人抗凝血或治疗前无菌采取患者自体静脉血液；