[发明专利]白细胞介素－2基因在慢性疼痛应用中的测试方法

权利要求书

1、一种白细胞介素-2基因在慢性疼痛应用中的测试方法，其特征在于该方法包括下列步骤：(1)pcDNA3-IL-2真核表达质粒的构建

人IL-2基因经EcoRI和XhoI酶切得到有EcoRI和XhoI接头的全长的含信号肽的人IL-2 cDNA，462bp，克隆入经相同酶切的pcDNA3载体，IL-2基因在CMV启动子的控制下表达，构建的质粒转化入大肠杆菌JM109扩增，碱裂解法制备质粒，聚乙二醇沉淀法纯化，通过测定260nm的光吸收来确定质粒浓度，注射时质粒稀释于含5％葡萄糖的磷酸盐缓冲液中；(2)重组腺病毒Ad5-IL-2的构建

人IL-2基因经EcoR I和XhoI酶切得到有EcoRI和XhoI接头的全长的含信号肽的人IL-2 cDNA，462bp，克隆入经相同酶切的pCA13载体，IL-2基因在CMV启动子的控制下表达，pCA13-IL-2与腺病毒基因组质粒pBHG10共转染293细胞，进行同源重组，筛选重组腺病毒，扩增纯化腺病毒，注射时病毒稀释于含5％蔗糖的磷酸盐缓冲液中；(3) 慢性神经病理痛模型的建立

大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤建立慢性神经病理痛；(4) 外周炎症痛模型的建立

大鼠后肢跖部皮下注射角叉菜胶建立外周炎症痛模型；(5) pcDNA3质粒介导IL-2基因对慢性神经病理痛的影响

大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤手术后30天，经第5与第6腰椎之间插入导管，鞘内分别注射5％葡萄糖PBS，50μg lipofectamine，25μg pcDNA3，25μg pcDNA3/50μg lipofectamine，10μgpcDNA3-IL-2，10μg pcDNA3-IL-2/20μg lipofectamine，25μgpcDNA3-IL-2，25μg pcDNA3-IL-2/50μg lipofectamine，n＝12-14，注射总体积为30μl，注射后每天测定伤害性辐射热所致缩腿反射潜伏期，连续7天；(6)腺病毒载体介导IL-2基因对慢性神经病理痛的影响

大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤手术后2周，经第5与第6腰椎之间插入导管，鞘内分别注射5％蔗糖PBS，5×10⁷pfu Ad5，5×10⁷pfu Ad5-IL-2，n＝15-18，注射总体积为10μl，注射后每周测定伤害性辐射热所致缩腿反射潜伏期，连续5周；(7)pcDNA3介导IL-2基因对外周炎症痛的影响

大鼠经第5与第6腰椎之间插入导管，鞘内或后肢跖部皮下注射5％葡萄糖PBS，50μg lipofectamine，25μg pcDNA3，25μg pcDNA3/50μg lipofectamine，10μg pcDNA3-IL-2，10μg pcDNA3-IL-2/20μg lipofectamine，25μg pcDNA3-IL-2，25μg pcDNA3-IL-2/50μglipofectamine，n＝8-10，注射总体积为30μl，2天后大鼠相同后肢跖部皮下注射角叉菜胶，注射后2.5小时测定伤害性辐射热所致缩腿反射潜伏期；(8)统计方法

采用单因素方差分析。

2、根据权利要求1所述的一种白细胞介素-2基因在慢性疼痛应用中的测试方法，其特征在于其中所述载体构建中用pcDNA3-IL-2或Ad5-IL-2表达IL-2蛋白质产物。

3、根据权利要求1所述的一种白细胞介素-2基因在慢性疼痛应用中的测试方法，其特征在于其中采用的给药途径为鞘内或病灶局部给药。

4、根据权利要求1所述的一种白细胞介素-2基因在慢性疼痛应用中的测试方法，其特征在于其中所述的慢性疼痛类型为神经病理痛、炎症痛或肿瘤痛。