[发明专利]厚壁孢子及其生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及厚壁孢子和大量生产Trichoderma herzianum SK-55的厚壁孢子或菌丝体、分生孢子和厚壁孢子的混合物的方法。

本发明中使用的Trichoderma herzianum SK-55菌于1992年12月9日保藏于位于日本国茨城县筑波市东1丁目1番3号的日本国经济产业省工业技术院生命工学工业技术研究所，保藏号为“微工研菌寄第13327号”，保藏人为株式会社北海道绿兴产。由该原保藏向基于布达佩斯条约的保藏的移管请求在1992年12月9日进行，保藏编号为BP-4346。

背景技术

在现有的菌丝体微生物中已知含有微量的厚壁孢子。所说的厚壁孢子已知的环境对应性高，不只是低温下，就是在高温下也不死亡。还提出了有关Nynbia susilpicora K-004(FERM BP-4448)的厚壁孢子和其诱导培养基的发明。

前述的天然存在的厚壁孢子因为极微量，所以将其收集起来使用非常困难。上述公知发明公开的培养基中，一般很难高效地大量生产菌丝体微生物。    

发明的公开

本发明通过通气培养Trichoderma herzianum SK-55，同时通过赋予厚壁孢子生成条件，结果成功地实现了大量生成厚壁孢子。

具体而言，将SK-55的菌丝体接种于和椎茸等培养基近似的培养基，通气搅拌，进行培养，在养分消耗时从外部给以强刺激，促进厚壁孢子化后，利用离心分离法或其他方法使培养基与体、分生孢子和厚壁孢子分离。

上述与椎茸等培养基近似的培养基是指，以葡萄糖、酵母提取液和聚胨为主材料，向其中加入必要的微量成分(如硫酸镁、氯化钙等)，此时不调整pH。

在上述培养中，温度为27-29℃，通气量为0.3vvm，接种后的搅拌速度为100-200rpm，接种量为0.5-0.8％，不进行pH的调整。

即，本发明的厚壁孢子的特征在于，将Trichoderma herzianumSK-55的菌丝体接种于含有葡萄糖、酵母提取液和聚胨的培养基，进行培养，得到含有分生孢子的厚壁孢子。培养基含有葡萄糖2.0-3.5％(质量)，酵母提取液0.3％(质量)，聚胨0.3％(质量)，硫酸镁0.05％(质量)，氯化钙0.05％(质量)和消泡剂0.001％(质量)。

本发明的厚壁孢子的生产方法的特征在于，将Trichodermaherzianum SK-55的菌丝体接种于含有葡萄糖、酵母提取液和聚胨的培养基，保持适度的温度并通气，继续搅拌，使菌丝体增殖，然后提高搅拌强度，促进孢子形成，继续通气培养后，分离上述培养液和生成的菌丝体、分生孢子和厚壁孢子。另外，适度温度为27-29℃，通气量为0.3vvm，搅拌速度为100-200rpm，接种量为0.7％，消耗掉培养基内的葡萄糖后，增加搅拌速度15-30％的同时继续通气培养。

上述发明中的培养基即使不调整pH，也不会影响菌丝体的增殖。

上述发明中，将培养温度调整为27-29℃，是因为该温度为Trichoderma herzianum SK-55菌丝体(以下成为SK-55)的增殖适宜温度。

上述发明中，从培养基中回收菌丝体和厚壁孢子时，使用常用于菌丝体分离的离心分离机或压榨过滤法。

本发明中，培养2日后加快搅拌速度(振荡速度)，是为了增加菌丝体增殖的困难性，促进厚壁孢子的生成。主要是在消耗尽葡萄糖时(2日后)增加搅拌速度，判断SK-55菌丝体发生自卫上的厚壁孢子化，在实际上也确实如此，促进了厚壁孢子的生成。

在上述发明中的培养基容量为100ml，通气量为0.3vvm，容量越大，当然通气量就越多。

根据本发明，可以大量获得耐热性优良且均质的SK-55的厚壁孢子。

利用本发明方法，可以得到大量生产SK-55的厚壁孢子的效果。

附图的简单说明

图1是本发明的实施例的培养时的葡萄糖与天数的关系图。

图2是同样的培养天数与厚壁孢子数等的图。

图3是同样的其他实施例的培养天数与厚壁孢子数等的图。

实施发明的最佳方案

实施例1