[发明专利]蛋白质的生产和蛋白质的输送

权利要求书

1.一种DNA构建体，其在DNA构建体与细胞染色体DNA内的靶位点同源重组时改变细胞内的靶基因的表达，DNA构建体包括：

(a)与靶位点同源的导向序列；

(b)外源调节序列；

(c)外显子；

(d)外显子未配对的3’末端的未配对的剪接供体位点；

其中，导向序列与靶位点同源重组后，除了靶基因的所有内生外显子外，细胞的染色体DNA还包括构建体-衍生的外显子，其中靶基因编码从下列组中选取的蛋白质，包括γ-干扰素，白细胞介素1，白细胞介素2，白细胞介素3，白细胞介素6，白细胞介素11，白细胞介素12，GSF-粒细胞(G-CSF)，CSF-巨噬细胞(M-CSF)，CSF-粒细胞/巨噬细胞(GM-CSF)，FSHβ，TGF-β，肿瘤坏死因子，胰高血糖素，骨生长因子-2，骨生长因子-7，TSH-β，蛋白激酶C，尿激酶，抗凝血酶III，DNA-se，α-半乳糖苷酶，酪氨酸羟化酶，血液凝血因子V，血液凝血因子VII，血液凝血因子X，血液凝血因子XIII，IL-2拮抗剂和可溶CD4。

2.依据权利要求1的DNA构建体，其中构建体衍生外显子包括与靶基因的第一内生外显子的DNA序列不同的DNA序列。

3.一种DNA构建体，其在DNA构建体与细胞染色体DNA内的靶位点同源重组时，改变细胞内的靶基因的表达，DNA构建体包括：

(a)与靶位点同源的导向序列；

(b)外源调节序列；

(c)外显子；

(d)在外显子3’末端的未配对的剪接供体位点；

其中，在导向序列与靶位点同源重组后，(b)-(d)位于靶基因的转录起始位点的上游，其中靶基因编码从下列组中选取的蛋白质，包括γ-干扰素，白细胞介素1，白细胞介素2，白细胞介素3，白细胞介素6，白细胞介素11，白细胞介素12，GSF-粒细胞(G-CSF)，CSF-巨噬细胞(M-CSF)，CSF-粒细胞/巨噬细胞(GM-CSF)，FSHβ，TGF-β，肿瘤坏死因子，胰高血糖素，骨生长因子-2，骨生长因子-7，TSH-β，蛋白激酶C，尿激酶，抗凝血酶III，DNA-se，α-半乳糖苷酶，酪氨酸羟化酶，血液凝血因子V，血液凝血因子VII，血液凝血因子X，血液凝血因子XIII，IL-2拮抗剂和可溶CD4。

4.依据权利要求3的DNA构建体，其中外显子包括与靶基因的第一内生外显子的DNA序列不同的DNA序列。

5.依据权利要求3的DNA构建体，其中靶基因编码α-半乳糖苷酶。

6.依据权利要求3的DNA构建体，其中构建体衍生的外显子与FSHβ基因的第一外显子相同。

7.依据权利要求6的DNA构建体，其中所获得的细胞表达人类糖蛋白α-亚单位。

8.依据权利要求6的DNA构建体，其中细胞在外源启动子的控制下表达人类糖蛋白α-亚单位。

9.依据权利要求3的DNA构建体，其中靶基因表达GM-CSF。

10.依据权利要求9的DNA构建体，其中构建体衍生的外显子编码GM-CSF前体蛋白的首先的50个氨基酸。

11.依据权利要求9的DNA构建体，其中构建体衍生的外显子编码包括官能信号肽的序列。

12.依据权利要求3的DNA构建体，其中靶基因编码G-CSF。

13.依据权利要求12的DNA构建体，其中构建体衍生的外显子编码G-CSF信号肽的首先的13个氨基酸。

14.一种DNA构建体，其在DNA构建体与细胞染色体DNA内的靶位点同源重组时，改变细胞内的靶基因的表达，DNA构建体包括：

(a)与靶位点同源的导向序列；

(b)外源调节序列；

(c)外显子；

(d)外显子3’末端的未配对剪接-供体位点；

其中，在导向序列与靶位点同源重组后，(b)-(d)位于靶基因的转录起始位点的上游，其中外源调节序列是腺病毒基因的调节序列，胶原质基因的调节序列，肌动蛋白基因的调节序列，HMG-CoA还原酶基因的调节序列，或EF-1α基因的调节序列。