[发明专利]碱性蛋白酶

说明书

技术领域

本发明涉及比活高且耐氧化性强、并且作为加入到洗涤剂中具有优良洗涤性的酶的碱性蛋白酶。

背景技术

蛋白酶常用于各种领域，例如包括洗衣用洗涤剂的各种洗涤剂、化妆品、沐浴剂、食品改良剂、以及例如助消化剂和抗炎剂的药物。其中，洗涤剂用蛋白酶在工业上已大量生产并且具有很大的市场规模。许多蛋白酶现已投放市场。

在大多数情况下，衣服上的污物不仅含有蛋白质，而且含有例如脂类和固体粒子的多种组分。因此要求洗涤剂具有足够高的洗涤性，以便除去这些实际的复合污物。从这一角度发现，碱性蛋白酶甚至在有高浓度脂肪酸的情况下能够保持酪蛋白水解活性，并且即使污物不是仅由蛋白质组分组成，而是由例如蛋白质和脂类的多种组分组成时能够呈现优良的洗涤性，并且其分子量为约43,000，本发明人对其申请了一专利(WO99/18218)。

然而，已需要在比活、耐氧化性和洗涤性方面优于上述碱性蛋白酶并且可以用于广泛组合物的洗涤剂的碱性蛋白酶。

发明内容

本发明人检索了这些主要来自酶变体的碱性蛋白酶。然而上述碱性蛋白酶在酶学性能方面与以枯草杆菌蛋白酶为代表的丝氨酸蛋白酶完全不同，以致枯草杆菌蛋白酶的改性位置没有提供有用信息。本发明人经过进一步研究发现，为了获得更好的比活、耐氧化稳定性和洗涤性，同时保持上述碱性蛋白酶的性能的新型碱性蛋白酶，它们必需在其氨基酸序列的预定位置具有一特定的氨基酸残基。

因此，本发明一方面提供了一种碱性蛋白酶，其中在SEQ ID NO：1的(a)84位、(b)104位、(c)256位或(d)369位或其相应位置的氨基酸残基缺失或者选自：

在位置(a)：精氨酸残基，

在位置(b)：脯氨酸残基，

在位置(c)：丙氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、谷氨酸或天冬氨酸残基，和

在位置(d)：天冬氨酸残基。

本发明另一方面还提供了一种碱性蛋白酶，其中在SEQ ID NO：1的(e)66或264位、(f)57、101-106各位、136、193或342位、(g)46或205位、(h)54、119、138、148或195位、(i)247位、(j)124位、(k)107位或(l)257位、或者在其相应位置的氨基酸残基缺失或者选自：

在位置(e)：谷氨酰胺、天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、丙氨酸、苏氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、缬氨酸、甘氨酸或异亮氨酸残基，

在位置(f)：赖氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺、苯丙氨酸、缬氨酸、精氨酸、酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、色氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、脯氨酸或丙氨酸残基，

在位置(g)：酪氨酸、色氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、苏氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、组氨酸、丝氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸或半胱氨酸残基，

在位置(h)：色氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、苏氨酸、缬氨酸、组氨酸、丝氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、精氨酸或半胱氨酸残基，

在位置(i)：色氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、苏氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、组氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸或半胱氨酸残基，

在位置(j)：丙氨酸或赖氨酸残基，

在位置(k)：赖氨酸、精氨酸、丙氨酸或丝氨酸残基，和

在位置(l)：缬氨酸或异亮氨酸残基。

本发明又一方面还提供了一种编码该碱性蛋白酶的基因、含有该基因的重组载体和含有该载体的转化体。

本发明再一方面还提供了一种含有该碱性蛋白酶的洗涤剂组合物。

附图简述

图1为描述碱性蛋白酶变体的洗涤性的图；图2为描述各个碱性蛋白酶变体的相对比活的图；和图3为描述用氧化剂处理之后各个碱性蛋白酶变体的相对残余活性的图。

实施本发明的最佳方式