[发明专利]一种增强多肽在体内稳定性的方法及其应用

权利要求书

1、一种增强多肽在体内稳定性的方法，该方法是指先在体外将多肽用化学分子修饰：即将多肽溶解在10-200mmol/L的盐类缓冲液中，再将修饰用化学分子溶解在10-200mmol/L的溶液中，将溶解后的化学分子加入多肽溶液中，在室温下反应30-60分钟或在4℃下反应2-20小时，也可以在37℃反应20-40分钟；将上述反应混合液通过脱盐柱，用盐类缓冲液洗脱，收集洗脱的多肽进行冷冻干燥或不冷冻干燥；并且在体外使修饰后的多肽直接加入含有5-20mmol/L EDTA的人血白蛋白的溶液中，在室温下反应30-60分钟或在4℃下反应2-20小时，也可以在37℃反应20-40分钟，反应终止时加入终浓度30-200mmol/L含有自由巯基的化合物或者含有自由氨基的化合物，与人血白蛋白以共价键的方式相连；在体内以静脉注射或局部注射的方式使修饰后的多肽与人血白蛋白以共价键的方式相连。

2、根据权利要求1的方法，所指的多肽由5-100个氨基酸组成。

3、根据权利要求1的方法，所指的多肽含有酶，或酶的抑制剂，或抗原、或抗体、或激素、或干扰素、或细胞因子、或生长因子、或分化因子等的全部或部分结构。

4、根据权利要求1和3的方法，所指的多肽是天然蛋白中部分结构的变异体。

5、根据权利要求1的方法，所指的盐类缓冲液是磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、碳酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液或硼酸盐缓冲液。

6、根据权利要求1的方法，所指的溶液是磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或注射用水，还可以是DMSO或DMF。

7、根据权利要求1、5和6的方法，所指的盐类缓冲液或溶液中的pH值为6-9。

8、根据权利要求1的方法，所指的脱盐柱是D-Dextran脱盐柱、KwikSep Dextran脱盐柱、Excellulose GF-5脱盐柱、或者是PD-10脱盐柱(Pharmacia#17-0851-01)。

9、根据权利要求1的方法，所指修饰多肽的化学分子可以是NHS马来酰亚氨酯类(MBS、Sulfo-MBS、SMPB、Sulfo-SMPB、GMBS、Sulfo-GMBS、EMCS、Sulfo-EMCS)、SMCC、Sulfo-SMCC、SIAB、Sulfo-SIAB、BMPA、Sulfo-KMUS、或者是EMCA；还可以是EDC、DMP、DMA、DMS、DSG、DSS、或者是BS3。

10、根据权利要求1的方法，所指的修饰方式可以是酰氨键、亚氨酰氨键，或者是酯键。

11、根据权利要求1的方法，对于溶解度较差的多肽，可加入非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或变性剂。

12、根据权利要求1的方法，所指的用化学分子修饰后的多肽在体内与人血白蛋白的特异氨基酸通过共价键结合。

13、根据权利要求1的方法，所指的用化学分子修饰后的多肽在体外与人血白蛋白的特异氨基酸通过共价键结合。

14、根据权利要求1、12和13的方法，所指的特异氨基酸是半胱氨酸，也可以是赖氨酸，还可以是其它含有自由氨基的氨基酸。

15、根据权利要求1、12和13的方法，所指的共价键是二硫键、或者是亚氨酯键。

16、根据权利要求1的方法，所指的含有自由巯基的化合物或者含有自由氨基的化合物是半胱氨酸、巯基乙醇、二硫苏糖醇、Tris、甘氨酸、赖氨酸或乙醇氨。