[发明专利]一种多肽——人含胞嘧啶特异性DNA甲基化酶特征性序列片段的蛋白－9.35和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人含胞嘧啶特异性DNA甲基化酶特征性序列片段的蛋白-9.35，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

C-5胞嘧啶-特异性DNA甲基化酶(C-5 Mtase)是一种特异性甲基化DNA胞嘧啶C-5碳原子的酶。DNA的这个甲基化修饰作用普遍发生于各种细菌以及植物和动物组织中。DNA甲基化作用是序列特异性的，C-5胞嘧啶-特异性DNA甲基化酶也是单个或多个序列特异性的。

DNA甲基化酶都有两个功能：识别特异性DNA位点和催化甲基转移。为此，DNA甲基化酶有几个不同的结构域。C-5胞嘧啶-特异性DNA甲基化酶家族分享许多短的保守区域。以下是我们选择的两个区域。第一个区域处于一个保守的脯氨酸-半胱氨酸二肽中心，其中半胱氨酸被证明参与了催化机制，它可能与胞嘧啶的C6形成共价中间物。脯氨酸-半胱氨酸中心的破坏将会严重影响C-5胞嘧啶-特异性DNA甲基化酶的活性。第二个区域则位于II型C-5胞嘧啶-特异性DNA甲基化酶的C末端。区域1保守序列片段为：[DENKS]-x-[FLIV]-x(2)-[GSTC]-x-P-C-x(2)-[FYWLIM]-S，

                 C是激活位点的氨基酸残基。区域2保守序列片段为：[RKQGTF]-x(2)-G-N-[STAG]-[LIVMF]-x(3)-

         [LIVMT]-x(3)-[LIVM]-x(3)-[LIVM]。

在高等真核生物中，胞嘧啶的甲基化可能与基因表达调控，发育调节，基因复制和X染色体激活有关。

由于如上所述人含胞嘧啶特异性DNA甲基化酶特征性序列片段的蛋白-9.35蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人含胞嘧啶特异性DNA甲基化酶特征性序列片段的蛋白-9.35蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人含胞嘧啶特异性DNA甲基化酶特征性序列片段的蛋白-9.35蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人含胞嘧啶特异性DNA甲基化酶特征性序列片段的蛋白-9.35以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人含胞嘧啶特异性DNA甲基化酶特征性序列片段的蛋白-9.35的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人含胞嘧啶特异性DNA甲基化酶特征性序列片段的蛋白-9.35的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人含胞嘧啶特异性DNA甲基化酶特征性序列片段的蛋白-9.35的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人含胞嘧啶特异性DNA甲基化酶特征性序列片段的蛋白-9.35的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人含胞嘧啶特异性DNA甲基化酶特征性序列片段的蛋白-9.35的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人含胞嘧啶特异性DNA甲基化酶特征性序列片段的蛋白-9.35异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中534-791位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-937位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。