[发明专利]一种多肽——蛋白酶体－61.82和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——蛋白酶体-61.82，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

本发明公开了一种新的多肽——蛋白酶体-61.82，编码此多肽的多核苷酸和经DNA重组技术产生这种多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于诊治多种疾病的方法，如糖尿病，低血糖症，巨人症，侏儒症，肢端肥大症，胃癌、肝癌、肺癌等。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其诊治作用。本发明还公开了编码这种新的蛋白酶体-61.82的多核苷酸的用途。

从成熟(in M-phase)和不成熟(in G2-phase)的卵母细胞中纯化出26S蛋白酶体，我们用免疫杂交的方法比较它们的亚单位。在26S蛋白酶体中，至少两个蛋白端，30kDa(GC3beta抗体探测出)和62kDa(1-4D5抗体探测出)。蛋白酶体是生物体内主要蛋白水解系统的重要组成部分，负责降解细胞内多种蛋白，包括结构上不稳定的调节蛋白及由于突变或外界环境发生变化导致的结构异常的一些蛋白(Coux et al.，1996；Hochstrasser et al.，1996)。当这些蛋白或其它的细胞内蛋白以多聚泛素链的形式共价地结合到泛素上以后，就成为26S蛋白酶体进行降解作用的靶子。26S蛋白酶体具有两个巨大的多蛋白混合体：20S蛋白酶体和PA700(也称19S混合物)。26S蛋白酶体中还含有一催化亚单位及一调节亚单位，分别在细胞内参与调控酶的作用活性及其与目的蛋白的结合[Nobuyuki Tanahashi，Chizuko Tsurumi et al.，1993，EnzymeProtein，47：241-251]。

人们已从多种不同的生物体内克隆得到了多种蛋白酶体调节亚单位，并对这些亚单位在细胞内的结构及作用活性进行了研究。最新研究，从人中克隆又得到了一新的蛋白酶体调节亚单位金鱼20S。该蛋白与已知的各种蛋白酶体调节亚单位具有相似的结构及功能特征，其在生物体内调控着相关蛋白与泛素的结合，进而调节蛋白降解途径的进行。其在相关的代谢调控及细胞周期进行过程中起重要的调节作用。

本发明的人的基因属于蛋白酶体家族，在蛋白水平上与蛋白酶体有88％的相同性及94％的相似性。基于以上各点，故认为本发明的蛋白为蛋白酶体，命名为蛋白酶体-61.82。并以此推断其与蛋白酶体相似，蛋白酶体家族的成员，并具有相似的生物学功能。在体内，其表达异常可引起26s蛋白酶体的水解功能，其表达异常可影响蛋白质生理活性物质的功能发挥，譬如说激素的功能发挥，进而导致与蛋白质肽类激素功能紊乱相关的疾病的发生。

由于如上所述蛋白酶体-61.82蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的蛋白酶体-61.82蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新蛋白酶体-61.82蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——蛋白酶体-61.82以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码蛋白酶体-61.82的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码蛋白酶体-61.82的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产蛋白酶体-61.82的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——蛋白酶体-61.82的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——蛋白酶体-61.82的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与蛋白酶体-61.82异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少89％相同性的多核苷酸。