[发明专利]一种多肽——人含肽基脯氨酸顺反异构酶特征性序列片段的蛋白－14.08和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人含肽基脯氨酸顺反异构酶特征性序列片段的蛋白-14.08，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

免疫亲和素是一种在多种组织中表达的管家基因。亲环素(Cyps)和FK506结合蛋白(FKBP)是其中的两个亚家族。前者与CsA结合，后者与FK506或纳巴霉素结合。CsA，FK506，纳巴霉素均为免疫系统抑制剂，是有诊断价值的免疫抑制性前体药物。CsA和FK506可以选择抑制早期T-cell活化，导致早期基因的转录失败，而这些基因编码的细胞因子参与多种细胞的免疫反应。这种对于T-cell活化的抑制作用可以用在诊断上抑制同种异体移植排斥。它们可以与内生性胞内受体如免疫亲和素结合形成复合物。该复合物可作用于蛋白磷酸酶，钙调磷酸酶和钙离子。

免疫亲和素具有肽基脯氨酸顺反异构酶(PPIase)活性，PPIase催化蛋白底物中的肽基脯氨酸的顺式、反式间的转化。PPIase具有高度的序列保守性，是一类在多种细胞类型中存在，具有不同生理分工的多功能酶。在细胞水平上，PPIase在每种部位都存在，既有镶嵌在膜上的，也有游离存在的。PPIase调控蛋白的折叠，合并和通道开放(Ca2+)。免疫亲和素与FK506结合会导致自身PPIase酶活性丧失，因为后者包含一个称为“螺旋氨基化合物替代物”(twisted amide surrogate)的结构，该结构模拟蛋白底物顺-反式肽基脯氨酸键转化的中间状态。有些免疫亲和素与免疫抑制剂结合形成复合物对哺乳类细胞有毒。除了该酶的酶活位点是药物结合位点外，免疫亲和素的PPIase酶活性与免疫抑制性药物的作用是无关的。在没有免疫抑制性药物存在的情况下，PPIase的作用主要是与细胞中富含脯氨酸的蛋白作用。FKBP含有脯氨酸结合口袋区和异构酶活性位点，这些结构与芳香类位点平行。因此，在活性位点上与富含脯氨酸的蛋白结合将会使脯氨酸的异构更容易。它只是脯氨酸结合的方便检测。

FKBP只有和免疫抑制药物FK506结合后才具有免疫抑制作用，FK506本身并不具有该种免疫抑制活性，所以FK506与CsA只是一种前提药物，它们也只有和免疫亲和素FKBP和Cyps结合后才能够与钙调磷酸酶等结合。免疫抑制素在此具有分子胶水的作用，将FKBP和钙调磷酸酶结合在一起

FKBP家族有很多成员，真核细胞，原核细胞中都有。这些酶的分子量在12-63kDa之间，等电点既有酸性的也有碱性的。FKBP在细胞质，膜和T-cell核中都有存在。FKBP家族成员的疏水性差别很大。FKBP具有PPIase酶的，但是与Cyps相比底物差异性很大。且FKBP家族成员的生物学功能差异也很大。FKBP-12是钙调素的辅助因子，并与钙离子释放通道紧密结合，与钙离子的释放有关。FKBP-52是多功能FK506结合蛋白，可以与90-Kda的热休克蛋白结合，是胆固醇受体复合物的组成部分，但当与FK506结合形成复合物时并无免疫抑制活性。FKBP-25干涉宿主细胞的免疫系统。FKBP-25还可与DNA结合，这种能力并不因与FK506或纳巴霉素的结合而丧失。FKBP36在很多组织如肝，肾，骨骼肌等中表达，在Williams综合症中缺失。

研究发现，FKBP蛋白家族的所有成员的蛋白序列中均含有如下两个高度保守的序列片段：序列片段1：[LIVMC]-X-[YF]-X-[GVL]-X(1，2)-[LFT]-X(2)-G-X(3)

       -[DE]-[STAEQK]-[STAN]；序列片段2：[LIVMFY]-X(2)-[GA]-X(3，4)-[LIVMF]-X(2)-[LIVMFHK]-X(2)

       -G-X(4)-[LIVMF]-X(3)-[PSGAQ]-X(2)-[AG]-[FY]-G；该两个保守的序列片段是蛋白的作用活性中心，其缺失或表达异常将导致蛋白的功能异常，进而引发各种相关的疾病。

由于PPIase调控蛋白的折叠，合并和通道开放，而免疫亲和素与FK506结合会导致自身PPIase酶活性丧失，因此FKBP与FK506的异常结合会影响蛋白的三维结构而使蛋白的功能受到影响。如果这种情况发生在调控细胞周期或细胞信号传递的关键蛋白上，就有可能使细胞增殖失控而导致各种肿瘤的发生。