[发明专利]一种葱莲凝集素蛋白及其编码序列

说明书

本发明涉及分子生物学、酶学、生理学以及基因工程等领域。具体地，本发明涉及一种在葱莲中表达的z-Lectin(葱莲凝集素蛋白，Zephyranthes candidaagglutinin,ZCA)蛋白及其核酸序列。本发明还涉及该蛋白和核酸序列的制备方法和用途。

近20年来凝集素在生物学方面的应用研究发展迅速，它最大的特点在于其能够识别糖和糖类，每一种凝集素具有对某一种特殊的碳水化合物有专一结合的能力(AnnBiochem,1981,50:207～231)。某些凝集素基因则具有较强的抗同翅目类昆虫包括蚜虫和飞虱功能(Entomol Exp Appl,1993,66:119～126；Transgenic Res,1995,4:18～25；Entomol Exp Appl,1995,75:51～59)。

本发明中，我们在葱莲中克隆到雪花莲g-Lectin凝集素(GNA)基因的同源基因z-Lectin。

在本发明被公布之前，尚未有任何公开或报道过本专利申请中提及的葱莲z-Lectin蛋白序列及其核酸序列。

本发明的第一目的就是提供一种新的葱莲基因z-Lectin，该基因是一个葱莲z-Lectin蛋白基因。

本发明的第二目的是提供一种新的葱莲蛋白z-Lectin。

本发明的第三目的是提供一种利用重组技术生产上述新的葱莲z-Lectin蛋白和核酸序列的方法。

本发明还提供了这种葱莲z-Lectin蛋白多肽和编码序列的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，该分子包括：编码具有葱莲z-Lectin蛋白质活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.3中从核苷酸第37-546位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.3中从核苷酸第37-546位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码具有SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ ID NO.3中从核苷酸第37-546位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离出的葱莲z-Lectin蛋白质多肽，它包括：具有SEQ ID NO.4氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.4序列的多肽。

在本发明的另一方面，还提供了一种载体，它包含上述的DNA分子。

在本发明的另一方面，还提供了一种用上述载体转化的宿主细胞。在实例中该宿主细胞是烟草。

在本发明的另一方面，还提供了一种产生具有葱莲z-Lectin蛋白质活性的多肽的方法，其步骤如下：

(1)将编码具有葱莲z-Lectin蛋白活性多肽的纯化的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成葱莲z-Lectin蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.3中从核苷酸第37-546位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)将步骤(1)中的表达载体转入宿主细胞，形成葱莲z-Lectin蛋白的重组细胞；

(3)在适合表达葱莲z-Lectin蛋白多肽的条件下，培养步骤(2)中的重组细胞；

(4)分离出具有葱莲z-Lectin蛋白活性的基本纯的多肽。

较佳地，在该方法中使用的核酸序列具有SEQ ID NO.3中第37-546位的序列。

本发明还提供了与z-Lectin蛋白多肽特异性结合的抗体，它包括多克隆抗体和单克隆抗体。

在本发明中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。