[发明专利]一种多肽——焦磷酸酶－8.91和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——焦磷酸酶-8.91，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

无机的焦磷酸酶是一种用于焦磷酸水解的酶，而焦磷酸是许多利用ATP的生物合成反应的产物，也是最重要的磷代谢产物。众所周知焦磷酸酶的催化作用需要二价的金属离子，尤其是结合二价的镁离子时活性最高。到目前为止，从不同生物体得到的许多焦磷酸酶已经被测序，这些生物体包括细菌如大肠杆菌及嗜热细菌PS-3、真菌、植物以及牛的视网膜等。通过对焦磷酸酶进行氨基酸序列分析发现，该酶氨基酸序列中的赖氨酸可能是焦磷酸酶的活性位点，对于该酶的催化活性非常重要[Lahti R.，Kolakowski L.F.Jr.等(1990)Biochim.Biophys.Acta 1547：338-345]。

此外，酵母线粒体中的一种焦磷酸酶的同功酶被确定为与能量的产生相关，其催化功能的发挥需要ATP合成中的解偶联剂的刺激。所有不同来源的焦磷酸酶的氨基酸序列中均含有如下所示的保守的一致性序列片段：

D-[SGDN]-D-[PE]-[LIVMF]-D-[LIVMGAC]该片段中的三个D为二价金属阳离子的结合位点，对于酶功能的发挥必不可少。

由于如上所述焦磷酸酶-8.91蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的焦磷酸酶-8.91蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新焦磷酸酶-8.91蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——焦磷酸酶-8.91以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码焦磷酸酶-8.91的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码焦磷酸酶-8.91的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产焦磷酸酶-8.91的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——焦磷酸酶-8.91的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——焦磷酸酶-8.91的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与焦磷酸酶-8.91异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中195-440位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1547位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制焦磷酸酶-8.91蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。

本发明还涉及一种体外检测与焦磷酸酶-8.91蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本发明多肽的量或生物活性。

本发明也涉及一种药物组合物，它含有本发明多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。

本发明还涉及本发明的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于焦磷酸酶-8.91表达异常所引起疾病的药物的用途。

本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。