[发明专利]一种多肽——锌金属内切酶－41.25和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种多肽——锌金属内切酶-41.25，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

基质金属蛋白酶是一群重要的包含锌原子的金属蛋白酶，它们负责细胞外基质组分的降解和参与一些疾病的发生过程，例如在正常胚胎发生和扰动中的胶原蛋白和蛋白聚糖以及关节炎、癌症、齿根骨膜炎和骨质疏松症。已定义的一个基质金属蛋白酶家族包含至少7个蛋白成员，它们的分子量从28000到92000并且都与胶原蛋白酶有关。所有的家庭成员都是以酶原的形式分泌的，降解位于N末端约10,000道尔顿多肽片段后变成活性蛋白质。

基质金属蛋白酶C末端下游有一个八肽区域，PRCGVPDV，其中包括两个高度保守的氨基酸残基。这个八肽区域参与基质金属蛋白酶的自我抑制作用[ParkA.J.，Matrisian L.M.，Kells A.F.，Pearson R.，Yuan Z.，Nayre M.J.Biol.Chem.266：1584-1590(1991)]。位于此区域内的一个半胱氨酸残基通过它的三个硫醇基团螯合活性位点的锌原子，从而抑制基质金属蛋白酶的活性。[Springman，E.B.，Angleton，E.，etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87，364-368]。

哺乳动物胞外基质金属蛋白酶是一种锌依赖的酶，它们由细胞分泌为一种非活性形式(酶原)，这种酶原与成熟的酶不同，它有一个N端的前肽。这个前肽C末端的下游两个氨基酸残基处有一个高度保守的八肽。该区域参与基质的自身抑制；在这个八肽中有一个半胱氨酸残基与活性位点的锌离子螯合，从而抑制酶活性，该区域被称为“半胱氨酸开关”或是“自身抑制区域”。该家族的特征序列模板为：P-R-C-[GN]-x-P-[DR]-[LIVSAPKQ]，其中的C与锌离子螯合(Woessner J.Jr.，FASEB J.5：2145-2154(1991))。

本发明的新的多肽与已知的锌金属内切酶在蛋白水平上具有34％的同源性和48％的相似性，并与之具有相似的结构特征，由此认为其是一种新的锌金属内切酶，命名为多肽命名，并与已知蛋白具有相似的生物学功能。该蛋白在生物体内与蛋白的限制性内切作用密切相关，其突变或表达异常将导致相关蛋白结构及功能异常。其通常与各种相关的肿瘤、关节炎等疾病的发生密切相关。该蛋白还可用于诊断及治疗上述各种疾病。

由于如上所述锌金属内切酶-41.25蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的锌金属内切酶-41.25蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新锌金属内切酶-41.25蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——锌金属内切酶-41.25以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码锌金属内切酶-41.25的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码锌金属内切酶-41.25的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产锌金属内切酶-41.25的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——锌金属内切酶-41.25的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——锌金属内切酶-41.25的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与锌金属内切酶-41.25异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中37-1164位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-2230位的序列。