[发明专利]柯萨奇病毒B分型免疫球蛋白抗体G酶免盒及制备方法

说明书

本发明涉及生物技术产品，具体涉及一种柯萨奇病毒(Cox)B1-6分型抗体IgG试剂盒及制备方法。

柯萨奇病毒B1-6对易感人群具有高度的传染性，儿童是最敏感的人群，病毒流行期儿童的感染率通常为10-20％家庭中所有敏感成员通常都被感染，因此，柯萨奇病毒B感染所致的相关疾病发病率较高，尤其柯萨奇病毒性心肌炎对儿童具有很大威胁的危害。临床的病原学较早期诊断对有效治疗有很重要意义。以往柯萨奇病毒B感染和致病的病原学确诊法是病毒分离和心肌荧光染色，但这两种方法的标本采集和处理较复杂，病毒分离和取心肌荧光染色程序烦琐，实验时间很长，因此病毒分离技术和取心肌荧光法的早期诊断优势不大。而从血清中检测柯萨奇病毒B1-6型分型抗体IgG是病毒较早期感染的主要标志，确定CoxB1-6型型别感染是最后的病原学诊断。

本发明的目的在于克服以往方法的不足之处，研制一种灵敏度和特异性高的诊断试剂盒。

本发明提供了一种CoxB1-6分型抗体IgG ELISA试剂盒，该试剂盒用CoxB病毒B1-6分型抗原包被，兔抗人IgG联接辣根过氧化物酶为检测抗体，检测血清中的CoxB病毒B1-6分型抗体IgG，并且试剂盒由下列组成：预包被反应条   96孔          酶结合物工作液   1瓶(10ml)样品稀释液     1瓶(6ml)      阳性对照         1支(200μl)阴性对照       1支(200μl)   20倍浓洗涤液     1瓶(13ml)显色剂A        1瓶(3ml)      显色剂B          1瓶(3ml)终止液         1瓶(3ml)

本发明的另一目的是提供了上述柯萨奇病毒B1-6分型抗体IgGELISA试剂盒的制备方法，该方法包括下列步骤：一、原材料及其规格

CoxB病毒B1-6分型IgG抗原的包被。酶标板：华东理工大学ELISA测定CV(％)＜10％阳性对照：诊断心肌炎患者血清，用本试剂盒测定A值＞0.8，放置-20

      ℃备用。阴性对照：选正常人血清，用本试剂盒测定A值＜0.09，放置-20℃备

      用。酶标抗体：兔抗人IgG-HRP，(辣根过氧化物酶，RZ＞3.0 Sigma进口)酶标记兔抗人IgG，双扩散1∶64。小牛血清：杭州四季清厂生产。其它试剂：

Na₂CO₃                 A.R

NaHCO₃                  A.R

小牛血清                 杭州四季清厂生产

Na₂HPO₄·12H₂O       A.R

NaH₂PO₄·2H₂O        A.R

NaCL                     A.R

Tweel-20                 化学纯

甘油                     化学纯

H₂O₂                   A.R

柠檬酸.H₂O              A.R

TMB                      熔点：168℃

EDTA                     A.R

H₂SO₄                 A.R

Tris                     A.R蒸馏水必需符合《中国药典》(1990)之规定细胞及动物要求：(1)Hela细胞(ATCC   CCL-2)(2)新西兰大白兔    2公斤左右二、包被抗体(CoxB病毒1-6分型抗原)的制备。(一)CoxB病毒1-6型的制备(1)CoxB病毒1-6型毒种来源：昆明生物所(2)Hela细胞来源：中科院细胞所(3)细胞传代：①培养剂配制：

PRMI1640基础培养过滤除菌，200ml基础培养剂中含：牛血清10％

青霉素4万单位

链霉素4万单位

6％NaHCO3 4ml

3％谷氨酰胺 6ml②胰酶(DT)配制：

用无Ca、Mg离子溶液配制0.3％胰酶消化液，用分散、消化细胞。③细胞传代：