[发明专利]淀粉酶同工酶诊断试剂盒的制备

说明书

本发明涉及一种淀粉酶同工酶诊断试剂盒的制备，属于酶学领域。

近年来，酶学在临床诊断与治疗中的应用发展非常迅速，现已分别发展为医学中的两个新领域，即诊断酶学和治疗酶学。目前已有上百种酶试验可用于临床诊断。临床酶学的这一发展，部分是由于测定技术的发展，使许多酶的测定已日益精确和简便，可用于常规测定。部分是由于认识到某些疾病发展过程中酶活力必然发生改变这一客观事实，特别是在疾病的早期，用X光片、CT还未能发现病灶时，而体内的酶活性已开始发生变化。如果能定期查体，可做到对疾病的早期发现。值得一提的是，目前临床上诊断酶学的应用多数是对酶的总活性的测定，并且市场上已有相应试剂盒销售，其缺点是缺乏器官特异性。目前有关酶活性测定的试剂盒约有20～30种，同工酶检测试剂盒约有3～5种，但多数用的是化学抑制法或免疫抑制法。而同工酶是指酶蛋白结构不同而具有相同的催化特性的一类酶，不同的同工酶来自不同的组织和细胞。当某一组织或器官发生病变时，由于组织受损或细胞膜通透性的变化，引起细胞内酶大量释入血液而引起血清酶活性的改变。通过同工酶的检测可确定患病部位，从而提高酶学诊断的特异性和敏感性，还可判断预后。目前由于自行配制酶显示液，因所用试剂品种繁多，规格不一，致使酶显示结果不稳定，结果判定不统一，且同工酶检测操作较繁琐，费时等等，特别是大型生化分析仪的应用，使临床生化检测的操作更简便，省时、省力，但其是对总酶活性的测定，缺乏组织特异性，相比较，同工酶的检测使病变早期定性和定位就精确的多了。

本发明的目的在于提供一种质量优良、性能稳定、重复性能好，同时大大简化了检测的操作过程且使用该试剂盒可使同工酶的检测操作规范化，从而使酶活性的检测及质量控制达到统一标准的淀粉酶同工酶诊断试剂盒的制备。

本发明的目的由如下技术方案实施：做醋纤膜电泳，其包括有：

(1)、配制浓度为0.02～0.2mol/L电极液，pH为7.5-9.0；

(2)、配制浓度为0.05～0.2mol/L泡醋纤膜缓冲液，分装安瓿A；

(3)、将碘液做为显色液，分装安瓿C；

(4)内装冰乙酸做为固定液，分装安瓿D；

(5)配制底物显色板：将琼脂糖或琼脂和做为底物的淀粉、缓冲液分装安瓿B，所述缓冲液的浓度为0.05～0.2mol/L，按重量百分比，其中所述淀粉和琼脂糖或琼脂分别为9.1％～70.6％，29.4％～91.0％，加入80～120ml缓冲液，加热溶解，分装安瓿B。所述安瓿B内的缓冲液为磷酸缓冲液，也可用Tris系列的缓冲液或顺丁烯二酸-NaoH缓冲液。

做琼脂糖凝胶电泳，其包括有：(1)配制浓度为0.02～0.2mol/L电极液，pH为7.5-9.0；(2)将碘液做为显色液，分装安瓿C；(3)内装冰乙酸做为固定液，分装安瓿D；(4)将淀粉、琼脂糖或琼脂按重量百分比，分别为9.1％～70.6％∶29.4％～91.0％，再加入80～120ml浓度为0.05～0.2mol/L泡醋纤膜的缓冲液中，加热溶解，制备为安瓿A。所述安瓿A中还可加入蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮，按重量百分比，蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉、琼脂糖或琼脂分别为1.3％～31.6％，6.0％～31.2％，41.7％～89.5％，1.2％～18.7％，加入80～120ml浓度为0.05～0.2mol/L泡醋纤膜的缓冲液中，加热溶解，趁热分装为安瓿A。所述电极液可以用巴比妥缓冲液，也可以用巴比妥-HCL缓冲液，也可用硼酸-NaoH缓冲液或阴极槽电极液用巴比妥缓冲液，阳极槽电极液用Tris-EDTA-硼酸缓冲液。所述泡醋纤膜缓冲液可以为二氨基二甲基1.3丙二醇-HCL缓冲液，也可以为三羟甲基氨基甲烷系列的缓冲液。

淀粉酶同工酶(Amy EC 3.2.11)。Amy分为胰型(P型)和唾液型(S型)两种同工酶。P型主要存在于胰腺，S型来自腮腺、唾液腺、水解食物中的淀粉。当急性胰腺炎时，P型淀粉酶活性增高；肺癌、卵巢癌时，S型Amy增强，可用于上述疾病的诊断和鉴别诊断。本发明的优点是：将试剂分装于安瓿内，便于保存，性能稳定，重复性好，减轻了劳动强度，改变了传统的人工配制试剂的繁琐。并由此而引起的操作过程中个体间存在的差异，从而使操作规范化，使酶的检测及质量控制达到统一的标准，同时使用试剂盒简化了操作过程，省时、快速、便于推广。尤其是当做大量样品检测时试剂盒更方便适用，为临床疾病的诊断和鉴别诊断提供依据。

实施例：

实施例1、做醋纤膜电泳，其包括有：

(1)、配制的电极液浓度为0.2mol/L的巴比妥缓冲液，pH为8.6；