[发明专利]一种防治果蔬采后软腐病的生物防治拮抗菌(BAY－1)及技术使用方法

说明书

本发明涉及一种防治果蔬采后软腐病的生物拮抗菌及技术使用方法，属于生物药剂技术领域。

我国是世界上水果蔬菜生产和销售的第一大国。从1993年开始，水果总产量超过巴西、美国和印度跃居世界第一位以来，正以每年增长10％左右的速度向前发展，2000年水果的总产量达到7500万吨(其中苹果占38.5％，梨占11.9％，柑橘占17.9％，葡萄占7.8％)，成为发展农村经济的主要支柱之一。由于水果的生产地都远离城市，而且成熟期也相对集中，需要有一定的贮藏和运输周期来调节市场的供求矛盾。然而，大量的采后损失(如腐烂，营养和水分损失)常常发生。尽管引起果蔬产品品质恶化的原因很多，但由病原微生物引起的病害腐烂是最主要的原因。

几乎所有重要的水果、蔬菜品种采后都会发生软腐病，生产者每年因此病而遭受的损失达数十亿美元。发达国家的新鲜果蔬因采后腐烂而造成的损失也在15-24％左右，而发展中国家由于缺乏冷藏设备和卫生条件较差，果蔬采后的损失高达50％。据统计我国每年水果蔬菜在采后的腐烂损失就高达300亿元之巨。由此说明，果蔬采后因腐烂所造成的损失是十分巨大的。

腐烂主要归因于病原微生物的致病作用，对这些病原菌侵染反应的分子基础信息正在迅速积累。防止腐烂，提高果蔬抗病的可能方法是减少病菌，控制病菌的传播，和提高寄主的抗病能力。但这个进展依赖于对病菌传播、侵染和寄主保卫反应的生化和分子机理的了解。果蔬软腐病已骚扰了生产者近三个多世纪，但危害果蔬的机理直到最近用分子生物学的手段才逐渐揭开。由于生物之间存在着拮抗作用，我们在研究果蔬采后病害的生物防治中主要选择对果蔬不造成危害的微生物来防治引起果蔬产品腐烂的病原真菌。在果蔬采后采后病害生物防治拮抗菌的筛选中，不但要选择对软腐病有明显抑制效果拮抗菌，同时，还要考虑到了有可能影响微生物拮抗能力的其它因素。

本发明的目的就是提供一种对果蔬采后腐烂有积极防治作用的生物拮抗菌及制备技术。

本发明的另一个目的是提供一种Pichia membranefaciens hansen在水果蔬菜防病上的应用及使用方法。

目前一般控制采后病害的技术方法是使用化学杀菌剂。使用化学杀菌剂虽然杀死了病原物，但是也杀死了许多有益微生物。同时，长期使用化学杀菌剂使许多病菌对其产生抗药性而降低了药剂的防病效果。同时，生产上为达到防病目的而加大化学农药的用量，不但增加了防病的成本，残留在果蔬产品上的化学农药还威胁着人类的健康和污染生态环境。本发明专利提供了能取代防治果蔬软腐病化学杀菌剂的生物拮抗菌，及其制备技术和使用方法为：

1．一种防治果蔬采后软腐病的生物拮抗菌(BAY-1)是从桃果实的伤口上分离获得，能有效防治果蔬软腐病的拮抗酵母菌，菌种拉丁名为：P.membranefaciens hansen。

2、其特征是：BAY-1的分离和筛选方法：从桃果实伤口处分离拮抗菌，用稀释平板法分离获得单菌落，将获得的单菌落进行培养，再通过“in vitro”和“in vivo”抑菌试验筛选即得。

3、BAY-1的10⁶-10¹⁰CFU/mL悬浮液可完全抑制贮藏中软腐病的发生，其防治效果不受贮藏温度的影响。

4、BAY-1悬浮液可与低浓度的化学农药配合使用，以降低化学农药的用量和减少在果蔬产品上的残毒。

经过上述制备及技术方法，科学合理，有效成分高，能完全抑制果蔬贮藏中软腐病的发生，不影响果蔬产品的品质，并且没有污染和残留。

软腐病是采后果蔬的常见病，病原菌为接合菌亚门中的匍枝根霉，能生存于空气、土壤或附在各种工具上，主要通过伤口侵入成熟果实，病果表面长出的孢子囊和孢囊孢子经震动、昆虫活动等方式散布，也可直接接触传病，其菌丝体为棉毛状，可伸展蔓延至临近健果。该菌低于0℃和高于39℃时生长停止，不会引起产品致病。但常温下发病迅速，3-4天即全果腐烂。所以该病一旦发生，常常给生产上带来巨大的经济损失。我们的研究进一步证明本发明具有以下特点：(1)用膜醭毕赤酵母原液，或与化学杀菌剂配合，能有效地防治苹果采后软腐病的发生。(2)果蔬采后常用的低温和气调贮藏环境并不影响该拮抗菌的抑病效果。(3)增加营养元素还可以提高该拮抗菌的生物力和抑病力。(4)使用该拮抗菌来防治果蔬采后软腐病，可以减少化学农药的用量和在果蔬产品上的残毒，对保护人体健康和防止环境污染都极为重要。同时，也有利于我国优质果蔬产品的出口创汇，经济效益和社会效益十分为显著。