[发明专利]海狸獭医药胸腺素注射液及其制造方法

说明书

本发明属于含来自哺育动物胸腺的医药用品技术领域，涉及一种海狸獭医药胸腺素注射液。

胸腺素又名胸腺肽是哺育动物胸腺产生的一簇多肽类物质，具有控制和调节动物免疫反应的作用，目前已被用于治疗免疫缺陷病以及多种免疫功能紊乱性疾病。常用的提取胸腺素的原料为小牛胸腺和仔猪胸腺，由于原料有限，导致成本极高，使胸腺素成为临床应用上的紧俏药物。中国发明专利公报1993年9月台22日公开了一篇“人胎胸腺素的制备方法”(公开号：CN1076361A)专利申请，该专利申请介绍了用5-8个月龄的正常胎儿的胸腺组织制备胸腺素的方法。很显然采用此种方法制备胸腺素，其原料来源更加有限，其制造成本更加高昂，其推广应用是很困难的。

本发明的目的是要提供一种具有资源丰富、制备的注射液活性高、无毒性、临床应用安全有效的海狸獭医药胸腺素注射液及其制造方法。

海狸獭又名海狸鼠、海狸、河狸，系草食哺育动物。海狸獭易人工养殖，繁殖率高，人工养殖成本低，目前，全国各地如山东省、黑龙江省、河北省、湖南省等地都有大量人工养殖，主要用于肉食。因此，用海狸獭胸腺提取胸腺素，资源十分丰富。

本发明的目的是用以下方式来实现的。海狸獭医药胸腺素注射液是从海狸獭胸腺提取的一簇多肽类物质，其胸腺素透析物活性高，其分子量小于10000，主要成分分子量小于6000。该注射液胸腺素多肽含量7-10毫克/毫升，活性测定E-玫瑰花结平均值25-28％，收率7-10克胸腺素/千克。

本发明制造海狸獭医药胸腺素注射液的方法包括以下工艺过程：

1、提取胸腺：在宰杀后的海狸獭身上提取新鲜胸腺，

2、匀浆：将新鲜胸腺除去脂肪，切成碎块置于高速组织捣碎机内，按每公斤胸腺加2-4升生理盐水，捣碎3-7分钟使成匀浆，冷冻离心机离心2000-4000转/分、7-13分钟得提取液，

3、加热去杂蛋白：将提取液于水浴中迅速加热至80-90℃，保持12-18分钟，迅速冷却至10℃以下，离心除去沉淀，收集清液，

4、丙酮沉淀：清液冷至4℃，加入4-6倍体积的-8--12℃丙酮于-8--12℃放置3-5小时，过滤收集沉淀，真空干燥得丙酮粉，

5、分段盐析：将丙酮粉溶于PH6.8-7.2磷酸盐缓冲液，使每毫升含蛋白质23-28毫克，加入PH6.8-7.2的饱和硫酸铵溶液使达23-28％饱和度，离心除去沉淀，上清液调PH3.8-4.2，加硫酸铵使饱和度达48-52％，离心收集盐析物，

6、脱盐、干燥：盐析物用冷含水丙酮反复重结晶脱盐，至检查无硫酸盐后，冷丙酮洗1-3次，次乙醚洗1-3次，抽干，真空干燥，

7、超滤：将脱盐干粉溶于生理盐水并调PH7.0-7.5超滤，得超滤液，

8、制剂：将超滤液无菌灌装于安瓿瓶中，熔封得所需成品。

本发明的制造方法操作简单，适于大批量生产，采用加热去蛋白工序使蛋白凝固较完全，易于除去；利用冷含丙酮对盐析物进行重结晶脱盐，大大缩短时间，减少了污染机会。因而用本发明方法制造的海狸獭医药胸腺素注射液活性高，无毒性，无热源，临床应用安全有效。

下面是本发明的非限定性实施例：

在宰杀后的海狸獭身上提取新鲜胸腺，将新鲜胸腺除去脂肪，切成碎块置于高速组织捣碎机内，按每公斤胸腺加3升生理盐水，捣碎5分钟使成匀浆，冷冻离心机离心3000转/分、10分钟得提取液，将提取液于水浴中迅速加热至85℃，保持15分钟，迅速冷却至10℃以下，离心除去沉淀，收集清液，清液冷至4℃，加入5倍体积的-10℃丙酮于-10℃放置4小时，过滤收集沉淀，真空干燥得丙酮粉，将丙酮粉溶于PH7.0磷酸盐缓冲液，使每毫升含蛋白质25毫克，加入PH7.0的饱和硫酸铵溶液使达25％饱和度，离心除去沉淀，上清液调PH4.0，加硫酸铵使饱和度达50％，离心收集盐析物，盐析物用冷含水丙酮反复重结晶脱盐，至检查无硫酸盐后，冷丙酮洗2次，次乙醚洗2次，抽干，真空干燥，将脱盐干粉溶于生理盐水并调PH7.2超滤，得超滤液，将超滤液无菌灌装于2毫升安瓿瓶中，熔封得所需的海狸獭医药胸腺素注射液成品。

用本发明制得的海狸獭医药胸腺素注射液对25位病人临床试验，对不同病种肌注或皮下注射5-10毫升，每周两次，类风湿关节炎有效率79％，重症肌无力为75％。对慢性乙型肝炎患者，隔日1次注射，每次注射10毫克持续现两个月，肝功能恢复正常，常见症状消失，对病毒性肝炎的总有效率80％以上。