[发明专利]一种多肽——苏氨酸合成酶－9.35和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——苏氨酸合成酶-9.35，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

从天门冬氨酸到苏氨酸的支路合成途径包括5个步骤，需要3种酶的催化。其中，苏氨酸合成酶催化最后一步，即将O-磷酸-L-高丝氨酸转运至苏氨酸和无机磷。

该酶是一种5’一磷酸吡哆醛依赖酶，它包括一个含有1542个核甘酸的完整开放阅读框(编码428个密码)，两个部分阅读框(一个位于起始密码上游273bp之后的630bp的阅读框，另一个是位于终止密码下游84bp之后的277bp的阅读框)(Regula Altmann-Johl.Peter Philippsen1996 Mol Gen Genet250：69-80)。在5’非编码区存在TATA盒以及GCN4蛋白结合位点。GCN4蛋白结合位点是5’非编码区的一小段重复序列5’-TGACTC-3’，该蛋白是氨基酸合成的一般调节蛋白。在终止密码下游21bp处，有一个富含GC的二分体对称性区域。转录时，该区域能形成一个稳定的茎区和噜噗二级结构。该结构具有不依赖p因子终止位点的特点，并且可能是位于操纵子末端转录的终止子。在一些满足下列条件的区域也可能存在转录终止信号：1)位于转录终止区域的富含AT的区域；2)与CAATCAA相关，3)二分体对称区位于该区域之前。

苏氨酸合成酶的顺反子区域由一段长的二分体对称性序列组成。该区域可能是转录的终止位点或先行位点(Rosenberg，M.andCourt，D.1979Ann.Rev.Genet.13，319-353)

在靠近苏氨酸合成酶基因的附近区域总是存在一些回文单元。这些回文单元中有一个编码127个密码子的开放阅读框，(1048bp-669bp)该阅读框的阅读方向与苏氨酸操纵子的方向相反。(Higgins，C.F.，Ferro-Luzzi A mes，G.，Barnes，W.M.，Clement，J.M.，Clement，J.，.and Hofnung，M1982Nature298，760-762)

苏氨酸合成酶包含一个保守的吡哆醛磷酸位点，该位点的基元序列是[DE]-X-[STVG]-X-[AS]-[FYI]-K-[DLISA]-[RVMF]-[GA]-[LIVMGA]。(ParsotC1986 EMBO J5：3013-3019)

酵母Saccharomyces cerevisiae THR4是用在PFL1的遗传基因文库中的互补的酵母thr4突变体克隆而成的。THR4位于一个2.2kb的片段(HindIII-ECORI)上并且已经做过序列分析了，它的开放阅读框包含1542个碱基，其中有514个密码子，位于495-2036。这个被转译的氨基酸序列的多个保守序列与大肠杆菌的苏氨酸合成酶(thrC)的多肽相类似。在5‘的非编码区，有两个中心序列控制整个氨基酸序列(TGACTC，另一个在相反的位置)。

本发明人的多肽与酵母的苏氨酸合成酶在蛋白水平上有35％的同一性和54％的相似性。基于以上各点，故认为本发明为一种新的苏氨酸合成酶，命名为苏氨酸合成酶-9.35。并以此推断其与酵母的苏氨酸合成酶相似，并具有相似的生物学功能。

由于如上所述苏氨酸合成酶-9.35蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的苏氨酸合成酶-9.35蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新苏氨酸合成酶-9.35蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——苏氨酸合成酶-9.35以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码苏氨酸合成酶-9.35的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码苏氨酸合成酶-9.35的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产苏氨酸合成酶-9.35的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——苏氨酸合成酶-9.35的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——苏氨酸合成酶-9.35的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与苏氨酸合成酶-9.35异常相关的疾病的方法。