[发明专利]乙肝病毒前S1抗体酶免测定试剂盒及制备方法

说明书

本发明涉及生物技术试剂，具体涉及一种乙肝病毒前S₁抗体酶免测定试剂盒及制备方法。

乙型肝炎病毒(HBV)的DNA序列分析表明HBV基因的S区由S、前S1、前S2所组成，其编码的蛋白有主要蛋白(HBsAg)，中分子蛋白(HBsAg加前S2)和大分子蛋白(HBsAg，前S2和前S1)，因前S1蛋白存在于大分子蛋白中，故感染血液中的前S1蛋白全部存在于HBsAg阳性血清中，前S1蛋白由108个或119个氨基酸组成，其长度因亚型而异，ayw亚型为108aa，adw亚型有119个aa，前S1蛋白位于病毒颗粒的表面，因而它具有高度的免疫原性。Milich以大分子蛋白免疫小鼠，然后做前S1各段合成肽的T细胞增殖试验，实验显示，前S1肽链的P1-21，12-32和94-117三段多肽可以引起的T细胞明显增殖，说明该三段氨基酸序列具有免疫原性，是免疫决定簇区，而P32-53及P74-89肽段不能在体外使T细胞增殖，提示该二段序列无免疫原性。对P1-21及12-32肽段的进一步研究，在用P12-32肽段免疫小鼠后，再用1-21和12-32可以引起相同的T细胞增殖，提示这二肽段的共同序列即P12-21是重要的抗原决定簇区，起了主要的激活作用。用更短肽链的实验结果又显示，P12-19的免疫活性只及P12-21的1.6％，P14-21的活性只及P12-21的0.4％，也即去掉P12-21氨基酸端或羧基端的氨基酸，就极度影响了P12-21的免疫原性，证实了引起T细胞对免疫原性识别的最小氨基酸数为10肽。在P12-21肽中，分别替代其中的第14，18和19位，免疫原性分别只相当于肽链的66.6％，0.7％和1.6％，说明P12-21的10肽中，第18和19位氨基酸对免疫原性最为重要。这对合成前S1多肽抗原有较高参考价值。而Alberti用P21-32，32-47及94-117三段前S1多肽均能检测到急性乙肝患者血清中的相应抗体，说明P32-53并非没有免疫原性，并且从前S1抗体的动力学态势分析，抗P32-47的前S1抗体具有更为重要的作用。多数急性乙肝患者早期先出现P32-47抗体，然后出现P21-32和P94-117抗体，有的患者只出现P32-47抗体，而另二种抗体始终阴性。在恢复顺利的急性乙肝中，P94-117抗体均与P32-47抗体同时存在，没有单独P94-117抗体阳性的情况，而在慢性乙肝中，往往就只有P94-117抗体而无另二种抗体，由此可见，P32-47及P21-32抗体多数出现于预后较好的急性乙肝中，而单独P94-117抗体阳性一般为慢性肝炎。

黑猩猩的感染实验证明，血清前S1抗原蛋白最早可在感染后的第5周从电泳带上检测到，至第8周血清中出现抗前S1抗体，18周时前S1抗原消失，在直至36周的整个观察期间，前S1抗体始终阳性，而抗HBs直至33周才出现，因为乙肝的潜伏期为6周-6个月，所以大多数急性乙肝发病时，抗前S1抗体就可呈现阳性结果，它是乙肝早期诊断的可靠指标。

前S1抗体一般出现于急性自限性乙肝中，而慢性化发展的急性乙肝及HBsAg长期携带者，该抗体的检出率都很低。Theilmanm报道入院时血清中前S1抗体阳性的4例急性乙肝均顺利康复，而6例前S1抗体阴性的未能康复而转为慢性，10例HBsAg携带者该抗体全部阴性。说明血清中出现前S1抗体是病情预后良好的早期信号。Budkowska也指出急性乙肝顺利康复的患者均有前S1抗体，而急性乙肝慢性化以及前S1抗原持续阳性的慢性肝炎中都检测不到前S1抗体。前S1抗体促进疾病康复的机理可能是前S1抗体发挥了PHSA的竞争抑制作用，抗体封闭了前S1抗原和肝细胞上的PHSA受体，使PHSA不能发挥“桥连”作用，从而阻断了HBV进入肝细胞的途径。另外，前S1抗体特异性地与HBV上前S1抗原结合后，通过其它免疫途径发挥了清除病毒的作用，因此，前S1抗体是体内的中和性抗体。近十多年来，众多国外研究报告显示，乙肝病毒的前S1抗体是中和性抗体，具有阻止病毒复制和清除病毒的作用，它是乙肝疾病呈现恢复趋向的最早期信号，在了解病情和判断预后方面较二对半项目更为直接和及时。因此，它是乙肝疾病的早期恢复指标，抗前S1抗体几乎与HBsAg及抗HBc同时出现于血清中，所以它又是乙肝感染的早期诊断指标。